畢業(yè)論文小鼠microrna-125b過表達載體構建

1、小鼠micrNA125b過表達載體構建目錄摘要............................................................................................................1Abstract................................................................................

2、......................31前言........................................................................................................42材料與方法...................................................................................

3、.........52.1材料...............................................................................................52.2主要試劑與儀器............................................................................52.2.1主要試劑.............

4、..................................................................52.2.2主要儀器...............................................................................52.3方法...........................................................

5、....................................62.3.1質粒提取...............................................................................62.3.2鼠尾基因組DNA提取........................................................62.3.3PCR引物設計與合成.......

6、...................................................72.3.4PCR擴增..............................................................................71摘要NPC1是一種以溶酶體內脂質異常沉積為特征的中樞神經系統(tǒng)退行性疾病，迄今為止對NPC1的發(fā)病機制仍得不到合理的解釋。研究發(fā)現(xiàn)miRNA對tau蛋白的調控

7、和神經元存活至關重要，通過調節(jié)蛋白激酶和蛋白磷酸酯酶來調節(jié)tau蛋白磷酸化水平。Tau蛋白過度磷酸化損傷神經細胞功能和結構，如過度磷酸化使Tau蛋白結合微管能力降低[1]，Tau蛋白在神經元內聚積導致神經元軸突轉運障礙[2]、乙酰膽堿釋放減少[3]、蛋白酶體活性抑制[47]，這些功能和結構的改變可能導致神經元呈慢性進行性變性構建miR125b表達載體，從tau蛋白磷酸化調控的研究入手，系統(tǒng)地研究參與tau蛋白磷酸化調控的miR125b的

8、靶基因，闡釋其中的分子作用機制，為tau蛋白異常病變引起的神經退行性疾病的研究與防治提供新的思路。本實驗目的：本實驗目的：構建小鼠micrNA125b（miR125b）過表達載體。方法：方法：參考小鼠miR125b前體序列的PCR擴增引物，重新設計限制性內切酶位點為NheI和EcI，PCR擴增，然后將目的片段和pcDNA3.1EGFP質粒進行雙酶切鑒定，使用T4DNA連接酶進行連接，轉化DH5α感受態(tài)細胞，挑取重組陽性克隆，對重組質粒進