蛋白激酶c調(diào)控人tenon39;s囊成纖維細胞增生的分子機制

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文蛋白激酶C調(diào)控人Tenon's囊成纖維細胞增生的分子機制姓名：馬萍申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：余克明20060501蛋白激酶C 調(diào)控人T e n o n ’S 囊成纖維細胞增生的分子機制 摘要與口錄M M C ( 0 ．4 m g f m l 、0 ．2 m g ／m l 、01m g ／m l 、O0 5 m g ／m 1 ) 和s i R N A - - P K C a ( 2 0 n M 、

2、5 0n M 、1 0 0 n M 、2 0 0 n M ) 分別作用于H T F 細胞，同時設(shè)有空白對照組，然后用M T T 法檢測M M C 作用及R N A 干擾后對成纖維細胞增殖能力的影響，繪制其量效曲線；并檢測s i R N A - - P K C 。轉(zhuǎn)染后部分細胞因了的改變。結(jié) 果1 、體外成功培養(yǎng)正常H T F 細胞，細胞呈長梭形，胞漿豐富，核大，生長能力強，呈旋渦狀或羽毛樣生長，V i m e n t i n 、F N

3、胞漿染色陽性，角蛋白染色I { } j 性。2 、發(fā)現(xiàn)H T F 細胞中1 2 種P K C 亞型在細胞、蛋白及基因3 種不同水平上均有基本相似的表達結(jié)果。L S C M 、R T - P C R 、W e s t e r n b l o t 發(fā)現(xiàn)在H T F 細胞中有P K C 。，P K C 6 ．P K C 。．P K C n ，P K C I ．P K C ^ ．P K C f , 和P K C u 等8 種亞型的分布，未見P

4、K C I j I ，P K C 口H ．P K C v ．P K C e 的表達；免疫細胞熒光方法同時可以看到表達蛋白在細胞中主要分布于胞漿部分。3 、設(shè)計合成的s i R N A 經(jīng)篩選獲得1 條較為高效的s i R N A ；體外培養(yǎng)的成纖維細胞經(jīng)R N A 干擾后2 4 小時，R T - P C R 檢測顯示：P K C 。的m R N A 受到了明顯抑制。4 、R T - P C R 檢測結(jié)果示：分別上調(diào)、下調(diào)P K C 。的

5、表達，發(fā)現(xiàn)C D K l 、C D K 2 、c y c l i n B 2 、c y c l i n D l 、c y c l i n D 3 、c y c l i n E l 、p 2 1 、p 1 9 、p 1 8 、R b 等細胞周期相關(guān)因子m R N A 水平發(fā)生了改變。5 、M T T 法結(jié)果顯示：M M C 和s i R N A - - P K C 。作用于體外培養(yǎng)的H T F 細胞后對細胞的增殖均有明顯抑制作用。M M

6、C 濃度為00 5 m g ／m l 、0 ．1 m g ／m l 、0 , 2m g ／m l 、O ．4 m g ／m l 時的抑制率分別為4 7 ．9 8 ％、5 98 1 ％、7 97 5 ％、8 50 5 ％，靶向R N A 干擾抑制P K C 。的轉(zhuǎn)染濃度為2 0 n M 、5 0n M 、1 0 0 n M 、2 0 0 n M 時的抑制率分別為4 2 1 ％、1 4 ．4 7 ％、3 91 9 ％、4 10 3 ％。但M