系列DNA切割體系的構建及其生物活性研究.pdf

1、本文以系列多吡啶配體為主要構筑元件，并輔以其它配體，設計合成了35個未見文獻報道的配合物，應用元素分析、紅外光譜和單晶衍射等方法對其組成和結構進行了詳細的表征;采用電子吸收光譜、熒光光譜、圓二色譜和瓊脂糖凝膠電泳等方法，從分子層次探討配合物與DNA或BSA的相互作用機制;此外，篩選部分配合物，采用MTT法、細胞克隆形成、Hoechst33342熒光染色、細胞周期阻滯、Annexin V/PI(或Annexin V/7-AAD)雙染、彗星

2、實驗和活性氧(ROS)等多種細胞生物學的實驗方法，從細胞層次對其抗癌活性和機制進行初步研究，從而為新型配合物型抗腫瘤藥物的研發(fā)提供有價值的信息。
　　本論文主要研究成果如下:
　　1、合成了五個新穎的多吡啶配體，利用核磁共振、元素分析、紅外光譜以及X-射線單晶衍射等方法對其進行表征。
　　2、利用上述五個配體合成了十個未見文獻報道的鋅配合物，解析了其單晶結構。鋅配合物與CT-DNA的作用均以中等強度的插入方式發(fā)生作用。

3、1-4和6-7的DNA切割機理以及無氧實驗的研究排除了氧參與的可能，初步判斷可能以水解方式斷裂DNA。1-4和6-7與BSA的鍵合作用以及其機理也被討論。利用MTT法測定了配合物1-4和6-7對體外腫瘤細胞生長的抑制能力，所有配合物對HeLa細胞均有較明顯的抑制能力，而單核鋅配合物6對MCF-7和7對RL952細胞的抑制能力比較接近甚至更優(yōu)于順鉑的。我們還對配合物3（對HeLa細胞）和6（對MCF-7細胞）進行克隆形成、Hoechst3

4、3342染色、細胞周期、以及Annexin V/7-AAD雙染等實驗來進一步探討了配合物的抗腫瘤活性及機理。
　　3、利用上述五個配體合成了十二個未見文獻報道的銅配合物，解析了其單晶結構。配合物與CT-DNA的作用均以中等強度的插入方式發(fā)生作用。在不加外界誘導劑下，四核銅配合物11表現出了強的斷裂DNA的能力。加入誘導劑過氧化氫、谷胱甘肽后，配合物12-22切割DNA的能力都有非常大的提高并初步推斷其可能以氧化方式斷裂DNA。配合

5、物11-19與BSA的鍵合作用以及其機理也被討論。利用MTT法測定了配合物12-19對體外腫瘤細胞生長的抑制能力，結果顯示所有配合物對這三個細胞系均明顯的抑制能力，尤其雙核配合物14表現出了較好的抗癌活性，比較接近甚至更優(yōu)于順鉑的抗腫瘤活性。我們還對配合物12和14對HeLa細胞進行克隆形成、Hoechst33342染色、細胞周期、AnnexinV/PI雙染、彗星實驗、以及活性氧(ROS)的產生等實驗來進一步探討了配合物的抗腫瘤活性及機

6、理。
　　4、利用上述五個配體共合成了五個未見文獻報道的鈷配合物，解析了其單晶結構。配合物與CT-DNA的作用均以中等強度的插入方式發(fā)生作用。在不加外界誘導劑時，鈷配合物表現出了較好的化學核酸酶活性:27＞23-25＞26，機理研究23-25和27可能以水解方式斷裂DNA，而配合物26可能以氧化方式斷裂DNA。23-25與BSA的鍵合作用以及其機理也被討論。
　　5、利用上述配體共合成了八個未見文獻報道的鎳配合物，其中鎳配合

7、物31-34是由混合配體構筑的，配合物30-34與CT-DNA的作用均以中等強度的插入方式發(fā)生作用。在無外界誘導劑、加入谷胱甘肽以及365 nm紫外光下照射等條件下，研究了配合物對DNA的斷裂程度并初步判斷其可能以氧化方式斷裂DNA。30-34與BSA的鍵合作用以及其機理也被討論。利用MTT法測定了配合物30-34對體外腫瘤細胞生長的抑制能力，配合物34對HepG-2細胞的抑制能力比較接近順鉑的，我們通過Hoechst33342染色實驗