N-亞甲基磷酸化修飾的殼聚糖非病毒轉(zhuǎn)基因載體的研究.pdf

1、本工作采用均相反應(yīng)法制備N(xiāo)-亞甲基磷酸化殼聚糖衍生物(NMPCS)，研究了其與DNA的復(fù)合能力，并將所形成的復(fù)合物用于介導(dǎo)體外基因轉(zhuǎn)染，同時(shí)考察了載體及其復(fù)合物的細(xì)胞毒性，主要內(nèi)容包括以下四個(gè)部分： (1)以紅外光譜(FT-IR)分析表明改性后的殼聚糖的特征基團(tuán)有顯著變化;13CNMR檢測(cè)進(jìn)一步證明了亞甲基磷酸基團(tuán)的引入，結(jié)合元素分析確定了取代度。 (2)通過(guò)復(fù)凝聚的方法，制備了納米尺寸的NMPCS/DNA聚電解質(zhì)復(fù)合物

2、?？疾炝斯簿畚锱cDNA的相互作用情況，復(fù)合物中DNA的構(gòu)象變化和復(fù)合物的形態(tài)和粒徑。圓二色譜結(jié)果表明DNA與殼聚糖作用形成納米尺寸的復(fù)合物后仍然保持著典型的B型構(gòu)象。透射電鏡，原子力顯微鏡檢測(cè)結(jié)果表明，不同N/P下的N-亞甲基磷酸化修飾的殼聚糖/DNA納米復(fù)合物呈現(xiàn)較規(guī)則的球形，且在高電荷比時(shí)可形成尺寸較小的納米尺度顆粒。 (3)以人肝癌細(xì)胞HepG2和人宮頸癌細(xì)胞HeLa為宿主細(xì)胞，嘗試了以NMPCS為載體介導(dǎo)含熒光素酶的pG

3、L3質(zhì)粒的體外轉(zhuǎn)染，重點(diǎn)研究了pH值和N/P比對(duì)轉(zhuǎn)染效率的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，載體可有效將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HeLa和HcpG2細(xì)胞，獲得的最佳轉(zhuǎn)染效率遠(yuǎn)高于裸DNA和CS，與PEI相當(dāng)。基于磷酸基團(tuán)對(duì)鈣離子有良好的鰲合能力制備了聚合物鹽型NMPCS-Ca載體，并用于介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染，其轉(zhuǎn)染過(guò)程類(lèi)似于傳統(tǒng)的P-Ca載體，并認(rèn)為Ca2+離子通道促進(jìn)了轉(zhuǎn)染過(guò)程?？疾炝?6-CS和NMPCS載體協(xié)同介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染研究，結(jié)果表明親疏水相互作用影響復(fù)合物的形成和