葡聚糖-胍基丁胺衍生物非病毒轉(zhuǎn)基因載體.pdf

1、本文利用對甲苯磺酰基葡聚糖與胍基丁胺的親核取代反應(yīng)制備了葡聚糖-胍基丁胺衍生物（Dex-Agm）載體；并采用CDI活化法先合成了月桂酸酯基-O-對甲苯磺?；暇厶?，再與胍基丁胺發(fā)生親核取代反應(yīng)制備了月桂酸修飾的葡聚糖-胍基丁胺衍生物（Dex-L-Agm）載體。凝膠電泳、透射電鏡和Zeta電位測定結(jié)果表明，Dex-Agm載體可將DNA壓縮成納米復(fù)合物，經(jīng)月桂酸改性后增強了壓縮DNA的能力，這可能與月桂酸疏水鏈段的物理吸附過程有關(guān)。對于CO

2、S-7和HEK293細(xì)胞系，胍基丁胺取代度的增加和疏水鏈段月桂酸的引入都可使載體介導(dǎo)的熒光素酶的表達(dá)量增加。通過流式細(xì)胞儀半定量分析了載體介導(dǎo)綠色熒光蛋白（GFP）在COS-7、HEK293和CHOK1細(xì)胞系中的表達(dá)，結(jié)果表明，疏水鏈段月桂酸的引入可明顯增加GFP的表達(dá)水平。通過溶血、紅細(xì)胞聚集實驗以及載體和其降解產(chǎn)物的細(xì)胞毒性實驗，考察了Dex-Agm和Dex-L-Agm載體的生物相容性，結(jié)果顯示，所構(gòu)建的載體不會造成溶血和紅細(xì)胞聚集

3、，這可能是由于載體的側(cè)鏈胍基丁胺上的胍基與細(xì)胞膜組分之間存在的是雙齒氫鍵作用，而不是會破壞細(xì)胞膜的強靜電作用。將細(xì)胞與Dex-Agm和Dex-L-Agm載體和其降解產(chǎn)物培養(yǎng)一定時間后，仍能維持80％存活率?？梢?，胍基丁胺修飾的葡聚糖載體有望成為一種理想的非病毒轉(zhuǎn)基因載體。
　　本文還通過以上提到的親核取代反應(yīng)，只改變胍基丁胺與組胺的摩爾投料比，制備了組胺修飾的葡聚糖-胍基丁胺衍生物（Dex-Agm-His）載體。結(jié)果表明，組胺引入