各種離子和生物蛋白在大管電泳中分離技術的研究.pdf

1、毛細管電泳技術具有高效、快速、樣品用量少、操作模式多樣化、易于與質(zhì)譜技術相連等特點和優(yōu)勢,已在分析化學、生物技術、制藥和醫(yī)學等領域得到廣泛應用,尤其在生物大分子的分離分析領域發(fā)揮著重要的作用。
　　 由于焦耳熱問題的存在,目前常用50μm或75μm的小內(nèi)徑毛細管作分離通道,細內(nèi)徑分離通道的采用,使得載樣量比較少,同時檢測靈敏度相對比較低,對于低含量目標組分的檢測具有一定的挑戰(zhàn)性,對其進一步分析存在一定的限制,所以如何從根本上解決

2、載樣量低的問題成為拓寬毛細管電泳技術應用領域的技術瓶頸。
　　 本論文在前期基礎上,構(gòu)建了一套大管電泳系統(tǒng),采用內(nèi)徑為1000μm的石英管為分離通道,大內(nèi)徑石英管的采用,使得載樣量大大增加,同時檢測靈敏度也相應得到提高,系統(tǒng)中引入了內(nèi)制冷機制,及時、有效地解決了焦耳熱的問題。
　　 本實驗中首先采用區(qū)帶電泳模式對大管系統(tǒng)的分離性能做了一系列的評價,通過對緩沖溶液pH值、濃度、內(nèi)制冷水流速和溫度、添加劑濃度、分離電壓的選擇

3、和優(yōu)化,成功實現(xiàn)了對六種有機酸、三種有機堿和生物大分子的分離,并且在優(yōu)化后的實驗條件下考察了實驗結(jié)果的重現(xiàn)性,取得了滿意的結(jié)果。隨后將大管區(qū)帶電泳應用于實際樣品的分析中,測定了醬油中防腐劑的含量。
　　 毛細管等點聚焦技術在蛋白質(zhì)分析中發(fā)揮著重要的作用,實驗中將毛細管等電聚焦模式轉(zhuǎn)移至大管系統(tǒng)中,為了得到較好的分離結(jié)果,首先對一系列的實驗條件進行了優(yōu)化,包括最佳檢測波長的確定、分離電壓、進樣體積,冷卻液的溫度和流速、兩性電解質(zhì)的