人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對CIK細(xì)胞增殖及殺瘤活性的影響.pdf

1、目的:
　　 探討人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(huMSCs)對細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK細(xì)胞)的增殖及殺瘤活性的影響。
　　 方法:
　　 分離正常人外周血單個核細(xì)胞,在細(xì)胞因子的作用下誘導(dǎo)獲得CIK細(xì)胞,每2天計數(shù)細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測CIK細(xì)胞免疫表型;培養(yǎng)正常人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)測細(xì)胞免疫表型確定其為干細(xì)胞,以第4～5代的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞為效應(yīng)細(xì)胞,以羧基熒光素乙酰乙酸(CFSE)標(biāo)記的CIK細(xì)胞為靶

2、細(xì)胞,以效靶比分別為1:1、1:10、1:20、1:40的比例共培養(yǎng)48小時后收集CIK細(xì)胞,單純培養(yǎng)的CIK細(xì)胞為對照,流式細(xì)胞術(shù)測CIK細(xì)胞的增殖活性。將huMSCs與CIK細(xì)胞按1:1比例共培養(yǎng)48小時后收集CIK細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)測定CIK細(xì)胞周期;以huMSCs作用的CIK細(xì)胞為效應(yīng)細(xì)胞,單純培養(yǎng)的CIK細(xì)胞為對照,肺癌細(xì)胞系LTPEP-2為靶細(xì)胞,MTT法檢測各組細(xì)胞殺傷活性。
　　 結(jié)果:
　　 外周血單核細(xì)

3、胞成功誘導(dǎo)CIK細(xì)胞;培養(yǎng)第21天的CIK細(xì)胞中CD3+CD8+細(xì)胞比例為(76.16±3.23)%,CD3+CD16+CD56+細(xì)胞比例為(28.43±1.51)%,而CD3+CD4+細(xì)胞比例降至(16.67±3.45)%。原代及第4代huMSCs均高表達(dá)CD73,CD90,CD105,不表達(dá)CD11b,CD45和HLA-DR,符合間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞免疫表型。huMSCs與CIK以1:1、1:10、1:20、1:40比例共培養(yǎng)48小時

4、后,CFSE熒光M1比值分別為(88.85±1.32)%、(30.53±2.01)%、(12.42±1.56)%和(10.14±2.34)%,M1的比值隨靶細(xì)胞數(shù)的增加而降低,各組間差異有顯著性(P＜0.05)。將huMSCs與CIK細(xì)胞按1:1比例共培養(yǎng)48小時后,CIK細(xì)胞G1期細(xì)胞比例由(62.39±3.86)%升至(89.37±2.57)%,而S期細(xì)胞比例由(33.75±2.29)減少至(9.71±2.84)%,差異有顯著性(P