TCONS_00023979在前列腺癌中的作用及其可能的調(diào)控機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的：
　　1、利用高通量芯片技術(shù)獲得在前列腺癌（PCa）組織與癌旁正常組織中差異表達(dá)的長鏈非編碼RNA（lncRNAs）和mRNAs；
　　2、驗(yàn)證TCONS_00023979及其臨近基因PML的差異表達(dá)情況，探索TCONS_00023979對臨近基因PML的調(diào)控作用；
　　3、探索TCONS_00023979對前列腺癌細(xì)胞的增殖、侵襲能力的影響。
　　方法：
　　1、進(jìn)行高通量lncRNA及mRNA混合

2、基因芯片檢測并得到前列腺癌組織和癌旁正常組織的差異基因表達(dá)譜。
　　2、通過芯片結(jié)果、鄰近編碼基因信息分析以及相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道篩選出其中的lncRNA分子作為研究對象。
　　3、收集13例前列腺癌根治術(shù)的組織標(biāo)本用qRT-PCR方法檢測TCONS_00023979及其鄰近基因PML在前列腺癌組織中的表達(dá)水平，并與芯片結(jié)果相比較。
　　4、構(gòu)建TCONS_00023979特異性的siRNA序列，轉(zhuǎn)染入DU145和LNCaP等

3、前列腺癌細(xì)胞下調(diào)TCONS_00023979的表達(dá)水平，并通過qRT-PCR技術(shù)篩選出干擾效果最佳的siRNA序列。
　　5、利用qRT-PCR和westernbolt技術(shù)檢測TCONS_00023979表達(dá)被干擾后對PML的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平的影響，根據(jù)結(jié)果探討TCONS_00023979對PML的調(diào)控作用。
　　6、進(jìn)行MTT、平板克隆以及Transwell等細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測TCONS_00023979表達(dá)水平的

4、下調(diào)對前列腺癌細(xì)胞生長增殖、侵襲能力的影響。
　　結(jié)果：
　　1、高通量芯片分析結(jié)果顯示共有多個(gè)lncRNA以及mRNA分子差異性表達(dá)，最終依據(jù)基因注釋信息及相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，獲得了9個(gè)mRNAs和相應(yīng)的13個(gè)lncRNAs，其中包括PML和TCONS_00023979。
　　2、多步驟篩選結(jié)果提示TCONS_00023979可能是與前列腺癌相關(guān)的關(guān)鍵lncRNA分子之一，而且組織qRT-PCR驗(yàn)證結(jié)果顯示：TCONS_0

5、0023979和PML在PCa組織中的表達(dá)水平均低于癌旁正常組織，與芯片結(jié)果保持一致。
　　3、下調(diào)TCONS_00023979的表達(dá)后進(jìn)行qRT-PCR和westernblot技術(shù)檢測后發(fā)現(xiàn)PML的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平也明顯下調(diào)。
　　4、干擾TCONS_00023979的表達(dá)后可導(dǎo)致DU145、LNCaP等前列腺癌細(xì)胞的生長增殖、侵襲能力明顯增強(qiáng)。
　　結(jié)論：
　　1、通過高通量基因芯片篩選分析，我們新發(fā)