果蠅PCNA蛋白的原核表達(dá)、初步晶體學(xué)研究與結(jié)構(gòu)分析.pdf

1、增殖細(xì)胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen，PCNA)，在DNA復(fù)制、DNA損傷修復(fù)、細(xì)胞周期調(diào)控、染色質(zhì)新陳代謝等生理活動(dòng)中發(fā)揮重要作用。為獲得全長(zhǎng)的PCNA的晶體結(jié)構(gòu)，本研究對(duì)果蠅源的PCNA在大腸桿菌BL21(DE3)中進(jìn)行表達(dá)，并采用親和層析、凝膠過(guò)濾層析進(jìn)行純化，獲得狀態(tài)穩(wěn)定均一、純度高、適于結(jié)晶的蛋白。蛋白結(jié)晶后運(yùn)用X射線(xiàn)晶體衍射方法進(jìn)行了初步晶體學(xué)分析，所得晶體分辨率達(dá)2.0(A)

2、，屬于H3空間群，晶胞參數(shù)a=b=115.16(A)，c=38.28(A)，α=β=90°，γ=120°。果蠅PCNA蛋白晶體結(jié)構(gòu)由分子置換的方法確定，以首尾相接的方式形成一個(gè)對(duì)稱(chēng)的同源三聚體，N-端和C-端結(jié)構(gòu)域通過(guò)結(jié)構(gòu)域間連接環(huán)連接，另外N-端和C-端結(jié)構(gòu)域也通過(guò)疏水作用力相互結(jié)合。與人源的PCNA相比，果蠅PCNA的結(jié)構(gòu)域間連接環(huán)存在構(gòu)象上的變化，這為兩者功能上的差異提供了依據(jù)。本研究為深入研究PCNA的功能提供了結(jié)構(gòu)生物學(xué)基礎(chǔ)。