抗DLL4抗體對(duì)哮喘小鼠Th17細(xì)胞分化的影響.pdf

1、目的：
　　1.研究Deltal樣配體4(Deltal-like ligand4，DLL4)抗體對(duì)哮喘小鼠體內(nèi)DLL4-Notch信號(hào)通路的阻斷作用。
　　2.闡明阻斷Dll4-Notch信號(hào)通路對(duì)哮喘小鼠氣道炎癥和哮喘癥狀的改變情況。
　　3.探討哮喘小鼠體內(nèi)阻斷DLL4-Notch信號(hào)通路對(duì)輔助性T細(xì)胞(Th)17分化的影響。
　　方法：
　　將30只4～6周，體重為20±2g的雄性Balb/c小鼠采用

2、隨機(jī)數(shù)字表法分為正常照組、生理鹽水組、哮喘模型組、抗Dll4抗體干預(yù)組、IgG對(duì)照組。模型通過以下方法制備:哮喘組小鼠分別在第1天和第13天通過小鼠腹腔注射0.01％卵清白蛋白(OVA)/氫氧化鋁[Al(OH)3]混合液0.1ml(其中含有OVA10ug和Al(OH)3凝膠20mg)致敏，第25天至第32天連續(xù)8天，每天用1％OVA生理鹽水溶液進(jìn)行霧化激發(fā)，每次30min，正常對(duì)照組代以生理鹽水致敏激發(fā)，生理鹽水組、抗Dll4抗體干預(yù)組

3、和IgG對(duì)照組每次激發(fā)前半小時(shí)分別予以腹腔注射200μ g生理鹽水、抗DLL4抗體、非特異性IgG。制備HE染色切片，以評(píng)估各組小鼠肺組織炎癥細(xì)胞浸潤、氣道形態(tài)變化情況。肺組織切片進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，采用Image-Pro-Plus6.0軟件分析DLL4光密度(optical density，OD)，半定量分析DLL4的表達(dá)。采用Western Blot(WB)法檢測(cè)小鼠脾臟分離淋巴細(xì)胞中維甲酸相關(guān)孤兒核受體(Retinoid-rel

4、ated orphan nuclear receptor，RORγt)的蛋白表達(dá)。采用流式細(xì)胞術(shù)(Flow cytometry，F(xiàn)CM)檢測(cè)小鼠脾臟分離淋巴細(xì)胞中Th17在CD4+T淋巴細(xì)胞中的比例，同時(shí)應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(enzyme linked immunoadsordent assay，ELISA)檢測(cè)各組小鼠血清中白細(xì)胞介素-17（Interleukin17，IL-17）的含量。
　　結(jié)果：
　　1.各組小鼠肺組

5、織病理學(xué)HE染色的情況
　　生理鹽水組、哮喘模型組、IgG對(duì)照組可見大量炎癥性細(xì)胞浸潤，正常照組未見炎癥性細(xì)胞浸潤，抗DLL4抗體干預(yù)組見較少炎癥性細(xì)胞浸潤。
　　2.各組小鼠肺組織Dll4的表達(dá)情況
　　生理鹽水組、哮喘模型組、IgG對(duì)照組DLL4光密度均值與正常對(duì)照組比較，均有顯著性差異（P＜0.01），抗體干預(yù)組Dll4的OD值與哮喘模型組比較，存在顯著性差異(P＜0.01)。
　　3.各組小鼠脾淋巴細(xì)胞T

6、h17細(xì)胞在CD4+T淋巴細(xì)胞中的比例情況
　　生理鹽水組、哮喘模型組、IgG對(duì)照組脾分離淋巴細(xì)胞中Th17細(xì)胞在CD4+T淋巴細(xì)胞中的比例與正常對(duì)照組比較均有顯著性差異（P＜0.05），抗體干預(yù)組脾分離淋巴細(xì)胞中Th17細(xì)胞在CD4+T淋巴細(xì)胞中的比例與哮喘模型組比較存在顯著性差異（P＜0.05）。
　　4.各組小鼠脾淋巴細(xì)胞RORγt的蛋白含量
　　生理鹽水組、哮喘模型組、IgG對(duì)照組小鼠脾臟分離淋巴細(xì)胞中RORγ

7、t蛋白表達(dá)水平與正常對(duì)照組比較均有顯著性差異(P＜0.01)，抗體干預(yù)組RORγt表達(dá)水平與哮喘模型組比較，存在顯著性差異(P＜0.01)。
　　5.各組小鼠血清IL-17含量的情況
　　哮喘模型組、IgG對(duì)照組小鼠血清中IL-17水平與正常對(duì)照組相比較，存在顯著性差異(P＜0.01)，抗體干預(yù)組小鼠血清IL-17的表達(dá)與哮喘組相比較存在顯著性差異(P＜0.01)。
　　結(jié)論：
　　1.抗DLL4抗體對(duì)哮喘小鼠體