RA患者外周血細(xì)胞亞群上Tim-3、Gal-9表達(dá)與炎癥和血管生成的相關(guān)性研究.pdf

1、研究目的：
　　類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種以對(duì)稱性多關(guān)節(jié)炎為主要表現(xiàn)的慢性自身免疫性疾病，病理特征是關(guān)節(jié)滑膜炎伴血管翳形成，即滑膜血管生成。血管生成是指已有血管在原位以芽生或非芽生形式生成新的血管，包括血管基底膜的退化和血管內(nèi)皮細(xì)胞周圍基質(zhì)的增殖、轉(zhuǎn)移等復(fù)雜過程。RA滑膜血管生成、全身炎癥細(xì)胞活化與炎癥因子分泌相互作用，密不可分。
　　T細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白-3（T cell imm

2、unoglobulin domain and mucin-3，Tim-3）是一種負(fù)免疫調(diào)節(jié)因子，廣泛表達(dá)于多種細(xì)胞，并參與機(jī)體的免疫應(yīng)答，它通過與多種配體的結(jié)合而發(fā)揮負(fù)性調(diào)控作用。半乳糖凝集素-9(Galectin-9，Gal-9)是Tim-3最重要的一個(gè)配體，二者關(guān)系密切，但是RA患者T亞群上Tim-3和Gal-9的研究目前報(bào)道不多。本研究旨在探討Tim-3、Gal-9在RA患者和健康對(duì)照者外周血中不同細(xì)胞亞群上表達(dá)的差異，分析其與R

3、A患者疾病活動(dòng)度、炎癥因子和血管生成水平的相關(guān)關(guān)系。進(jìn)一步明確Tim-3、Gal-9與炎癥反應(yīng)、血管生成的相關(guān)性，即這兩個(gè)因子能否成為RA病情活動(dòng)和血管生成的生物學(xué)標(biāo)志物。
　　研究方法：
　　收集山東大學(xué)齊魯醫(yī)院風(fēng)濕科門診和病房處于疾病活動(dòng)期的RA患者共87例，組成類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者組（RA組），所有入組的RA患者均符合1987年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)(ACR)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎分類標(biāo)準(zhǔn)。采用歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟(EULAR)頒布的DAS28

4、評(píng)定患者的病情活動(dòng)度，所有RA的DAS28均大于2.6。收集患者的性別、年齡、外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、血沉(ESR)、C反應(yīng)蛋白(CRP)以及關(guān)節(jié)壓痛(T28)和腫脹數(shù)目(SW28)等臨床信息，并對(duì)每個(gè)患者做健康評(píng)估問卷(HAQ)調(diào)查，計(jì)算疾病活動(dòng)指標(biāo)DAS28、簡(jiǎn)化的疾病活動(dòng)性指數(shù)(SDAI)等。同時(shí)收集我院查體中心健康體檢者63例，組成健康對(duì)照組（HCs組）。
　　采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)所有受試者外周EDTA抗凝全血的三個(gè)T細(xì)

5、胞亞群即CD4+、CD8+、CD4-CD8-(Double negative T cell，DNT)占T細(xì)胞的百分比，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Regulatory T cells，Treg)占CD4+T細(xì)胞的百分比及單核細(xì)胞(MC)占白細(xì)胞的百分比，測(cè)定各亞群上Tim-3、Gal-9、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1(VEGFR1)的表達(dá)水平。采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定技術(shù)(ELISA)檢測(cè)血漿中TNG-α、IL-6、IL17、IL

6、-37、VEGF(pVEGF)、Gal-9(pGal-9)的表達(dá)水平，并使用SPSS20.0軟件進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計(jì)分析。
　　研究結(jié)果：
　　1.RA組WBC、Treg、MC細(xì)胞的百分比高于HCs組，而淋巴細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、DNT細(xì)胞均低于HCs組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2.RA組CD4+、CD8+、Treg、DNT、MC細(xì)胞膜上Tim-3的表達(dá)水平均高于HCs組，且兩組均值的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

7、P＜0.05);RA組各亞群胞內(nèi)Gal-9的表達(dá)率與HCs無統(tǒng)計(jì)學(xué)差別。
　　3.ELISA結(jié)果顯示RA組患者血漿中pVEGF、IL-6、TNF-α及pGal-9的濃度均高于HCs組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　4.對(duì)RA患者進(jìn)行各指標(biāo)間的相關(guān)分析，發(fā)現(xiàn)不同T亞群上Tim-3的表達(dá)率之間存在明顯的正相關(guān)關(guān)系，說明所有亞群上Tim-3是同向變化的。另外，CD4+、CD8+、Treg上的Tim-3僅與CD8+ G

8、al-9具有正相關(guān)性，各亞群Tim-3的水平與炎癥因子、病情活動(dòng)度的指標(biāo)不相關(guān)。
　　5 RA組的患者中CD4+、CD8+、Treg、DNT和MC細(xì)胞亞群上的Gal-9相互之間具有正相關(guān)性，說明這些亞群上Gal-9是同向變化的。各細(xì)胞群上的Gal-9表達(dá)水平與血漿TNF-α、T亞群上VEGF和VEGFR1以及與病情活動(dòng)度指標(biāo)如DAS28、CRP、SDAI等存在正相關(guān)關(guān)系。
　　6.RA組患者的五個(gè)亞群細(xì)胞中VEGF水平之間、

9、VEGFR1表達(dá)率之間以及VEGF和VEGFR1二者之間具有明顯的正相關(guān)關(guān)系。T亞群上的這兩個(gè)指標(biāo)與血漿TNF-α濃度和疾病活動(dòng)度指標(biāo)DAS28、SDA1等存在正相關(guān)關(guān)系。
　　研究結(jié)論：
　　RA患者T亞群的分布與HCs組相比存在差異，RA組Treg細(xì)胞高，而雙陰性T細(xì)胞低，提示兩類負(fù)性調(diào)控細(xì)胞的表達(dá)率和活性調(diào)節(jié)機(jī)制不同。RA各細(xì)胞亞群上的Tim-3、Gal-9均與HCs不同，二者的變化規(guī)律并不一致，Tim-3在各個(gè)細(xì)胞亞

10、群上顯著升高，但與疾病活動(dòng)度不相關(guān)。RA患者Gal-9在T亞群上的表達(dá)與HCs無差異，但與疾病活動(dòng)度具有正相關(guān)關(guān)系，與炎癥因子TNF-α也存在相關(guān)性。另外Gal-9與VEGF、VEGFR1存在相關(guān)性，表明Gal-9與血管生成有密切關(guān)系，而VEGF、VEGFR與疾病活動(dòng)度、炎癥水平也相關(guān)的現(xiàn)象則進(jìn)一步揭示血管生成、炎癥因子、免疫細(xì)胞相互作用，共同促進(jìn)RA患者的免疫失調(diào)、炎癥反應(yīng)，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)滑膜增生和骨質(zhì)破壞。因此，Tim-3反映RA的疾