實驗性自身免疫性腦脊髓炎大鼠腦組織中TIM-3和GAL-9的表達變化.pdf

1、目的：
　　 觀察實驗性自身免疫性腦脊髓炎（experimental autoimmuneencephalomyelitis，EAE）大鼠腦組織中T細胞免疫球蛋白和黏液域蛋白-3（T cell immunoglobulin and mucin domain，TIM-3）以及其配體半乳凝素-9(Galectin-9，GAL-9) mRNA在不同時間點的表達，同時測定白介素(Interleukin-17，IL-17) mRNA的變化

2、，探討TIM-3/GAL-9通路在EAE發(fā)生發(fā)展中的可能機制。
　　 方法：
　　 48只雌性Wistar大鼠隨機分成2組:佐劑組24只，EAE組24只，各組再隨機分成發(fā)病初期（取抗原免疫后第8天），發(fā)病高峰期（取抗原免疫后13天），緩解期（取抗原免疫后第16天）和恢復期（取抗原免疫后第22天）四個亞組。用豚鼠脊髓勻漿(guinea pig spinal cord homogenate，GPSCH)、完全福氏佐劑(com

3、plete freund's adjuvant，CFA)致敏雌性Wistar大鼠，建立EAE組。佐劑組使用同量的生理鹽水代替豚鼠脊髓勻漿，余過程相同。將免疫抗原注射日定為第0天，觀察各組大鼠發(fā)病、體重變化情況并進行神經(jīng)功能評分。HE染色及LFB染色觀察各發(fā)病組大鼠腦組織中病理變化。利用RT-PCR方法觀察各組發(fā)病初期，發(fā)病高峰期，緩解期，恢復期腦組織中TIM-3、GAL-9以及IL-17 mRNA表達變化。對TIM-3、GAL-9與IL

4、-17mRNA進行相關性分析。統(tǒng)計學分析采用SPSS17.0軟件包進行。
　　 結果：
　　 1.各組大鼠發(fā)病結果:佐劑組無大鼠發(fā)病。EAE組共有20只大鼠發(fā)病發(fā)病率為83.33％。EAE組大鼠第8-10天開始發(fā)病，12-14天為發(fā)病達到最高峰，15-17天疾病緩解，18-22天病情恢復。EAE組體重損失隨病情的加重而增加，佐劑組體重無明顯的變化。
　　 2.大鼠腦組織病理結果觀察:佐劑組大鼠的腦組織HE染色和L

5、FB染色均未發(fā)現(xiàn)明顯異常改變。EAE組在臨床癥狀出現(xiàn)前，大鼠的腦組織HE染色和LFB染色與佐劑組物無明顯區(qū)別。第8天腦組織中出現(xiàn)炎性病灶;第13天時炎性病灶范圍擴大、數(shù)目增加， LFB染色可見典型的脫髓鞘改變;第16天時炎性病灶減少、程度減輕，第22天已接近正常組。
　　 3.各組大鼠腦組織RT-PCR結果:計算TIM-3/GAPDH的灰度值比值、GAL-9/GAPDH的灰度值比值進行統(tǒng)計學分析。與佐劑組比較，TIM-3mRNA

6、在EAE組發(fā)病初期表達就上升(P＜0.05)，隨著病進展繼續(xù)上升，到疾病緩解期上升至最高（與發(fā)病初期比較P＜0.05），恢復期表達下降，仍高與佐劑組(P＜0.05)。GAL-9 mRNA在EAE發(fā)病初期表達就開始上升（與佐劑組比較，P＜0.05），隨著病情加重在高峰期表達量上升至最高（與發(fā)病初期比較，P＜0.05），疾病緩解期和恢復期下降，仍高于佐劑組（與佐劑組比較，P＜0.05）。IL-17 mRNA在發(fā)病初期表達升高（與佐劑組比較，

7、P＜0.05），高峰期升高明顯(與發(fā)病初期相比，P＜0.05)，緩解期和恢復期明顯下降，恢復期與佐劑組比較差異無顯著性(P＞0.05)。
　　 TIM-3 mRNA及GAL-9 mRNA與IL-17 mRNA表達量的相關性分析示:EAE組大鼠腦組織中TIM-3 mRNA及GAL-9 mRNA與IL-17 mRNA表達量正相關(P＜0.01)，相關系數(shù)分別為0.699和0.897。
　　 結論：
　　 1.EAE大