海洋產(chǎn)多糖細菌的篩選及多糖發(fā)酵的研究.pdf

1、近年來,隨著海洋資源的開發(fā)和應用,海洋多糖,尤其是海洋細菌多糖已經(jīng)越來越引起科研工作者的注意。本論文從樣本采集、菌種的分離純化、產(chǎn)多糖菌株篩選、種屬鑒定、親緣關系構建、發(fā)酵條件優(yōu)化、多糖分離純化及結構鑒定等多個方面對海洋細菌502A(Aerococcus urinaeequi HZ)進行了系統(tǒng)的研究。其結果主要如下:
　　1.本實驗從鮑魚養(yǎng)殖環(huán)境篩選出活性菌株228株,采用苯酚-硫酸法檢測得到產(chǎn)多糖菌株23株,其中8株細菌的多糖的

2、產(chǎn)量超過了0.5g/L,進行多次重復實驗,從其中篩選出1株生長周期短、產(chǎn)量穩(wěn)定的菌株命名為502A,經(jīng)染色檢測為革蘭氏陰性菌,長桿狀,在Zobell2216E固體培養(yǎng)基菌落較大(直徑>2MM),菌落乳白色,圓形,隆起,邊緣較圓整,不透明,無遷移性。經(jīng)過16SrDNA序列比對,及NCBI檢索,確定其種屬為Aerococcus urinaeequi,并對其親緣關系進行了構建。
　　2.在已有單因素實驗基礎上,對菌株502A發(fā)酵生產(chǎn)多糖

3、的培養(yǎng)基組分進行正交優(yōu)化,結果為3％蔗糖、0.25％牛肉膏和3％的海鹽;通過Plackett-BurMan實驗設計從眾多發(fā)酵因素中篩選出影響較顯著的因素:培養(yǎng)時間、溫度和搖床轉速,并通過中心組合實驗設計,用響應面方法優(yōu)化得到最佳發(fā)酵條件為搖床轉速230rpM,26℃,培養(yǎng)35小時,多糖最高產(chǎn)量為2.34g/L。
　　3.采用水提醇沉的方法提取發(fā)酵液中的粗多糖,并通過Sevage試劑除去粗多糖中的蛋白質(zhì),經(jīng)紫外掃描檢測無蛋白和核酸殘

4、留后,多糖樣品過DEAE-52柱和Sephadex G100柱進一步除雜純化,通過高效凝膠滲透色譜(HPGPC)檢測多糖的相對純度均一,并測得其重均分子量Mn=2.84×105,數(shù)均分子量Mw=2.22×105,分布系數(shù)為1.28。
　　4.經(jīng)GC-MS、IR、NMR分析可得,EPS-1主要由木糖、葡萄糖、甘露糖和阿拉伯糖組成,并含有少量的葡萄糖甙、半乳糖和甘油醛且均為β構型。
　　海洋細菌生活在低溫環(huán)境中,多糖合成所需要的