碎米薺硒多糖的提取、分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定及生物活性研究.pdf

1、碎米薺是全國普遍分布的野生植物，屬于十字花科，又名菜子七、半邊菜，為民間常用藥物，然而對碎米薺的生理和基本的生化組成進行分析及其活性成分進行研究利用的還未見報道。將多糖與硒有機結(jié)合成的硒多糖不但把無機硒轉(zhuǎn)化成了有機硒，其化學(xué)結(jié)構(gòu)形成了特殊的硒氧鍵，也有別于普通多糖，不僅可以使癌細胞DNA合成受阻而抑制癌細胞的生長，而且可以通過提高相關(guān)酶的活性來拮抗重金屬中毒和抗氧化活性的能力，其生物活性普遍高于多糖和硒，更易于為機體的吸收和利用，近兩年

2、有研究報道從人工富集硒的靈芝、螺旋藻、海藻等植物中提取的硒多糖有明顯的免疫調(diào)節(jié)作用，但對天然植物中提取的硒多糖的功能研究目前未見報道。本文以湖北恩施富硒地帶碎米薺為研究對象，利用生物大分子研究的最新技術(shù)和現(xiàn)代分離手段，對碎米薺硒多糖進行分離純化，并進一步對其結(jié)構(gòu)特征及生物活性進行研究，主要結(jié)果如下： 1.樣品的確定及碎米薺根的生化組成研究 以湖北恩施地區(qū)多年生碎米薺為研究對象，對其根、莖、葉進行硒含量分析的基礎(chǔ)上，選定碎

3、米薺根作為實驗樣品。并對根的生化組成作了比較系統(tǒng)的分析，測定了水分、灰分、蛋白質(zhì)、脂肪、類胡蘿卜素、葉綠素和礦物元素的含量。 2.碎米薺硒多糖的提取、分離純化和純度鑒定 以碎米薺根為原料，采用水提、醇沉法制備出碎米薺硒多糖，并確定了適合硒多糖提取的最佳工藝，即浸提溫度為75℃，浸提系數(shù)2次，浸提時間為2h，料液比為1：40，硒多糖的提取率43.35％，硒多糖中硒含量為1.965mg／kg。利用DEAE-Cellulose

4、-52離子交換層析，采用步進式洗脫模式成功的將碎米薺硒多糖進行SepHdexG-200葡聚糖凝膠柱層析，得到四種均一的硒多糖，SDS-PAGE電泳法鑒定其純度。 3.碎米薺硒多糖的結(jié)構(gòu)鑒定 采用紫外分光光度計、傅立葉紅外、氣相、氨基酸分析儀等方法測定了碎米薺硒多糖的分子結(jié)構(gòu)、單糖組成和氨基酸組成分析。 4.碎米薺硒多糖的抗氧化活性研究 用K<,3>［Fe（CN）<,6>］和脫氧核糖－鐵體系，測定碎米薺硒多

5、糖的還原力，對羥自由基（-OH）的抑制作用和對超氧陰離子的清除作用；用丙二醛（MDA）試劑盒測定小鼠肝勻漿和肝線粒體中MDA含量，分光光度法測定小鼠肝線粒體腫脹度；用GSH－PX試劑盒測定小鼠全血及肝勻漿中GSH－PX活力，結(jié)果顯示碎米薺硒多糖具有明顯的抑制.OH和超氧陰離子的作用，其對兩種自由基的半抑制濃度（SC<,50>）分別為10.94mg/ml和7.65mg/ml；在體外，10mg·ml<’-1>碎米薺硒多糖對肝勻漿MDA生成抑

6、制率分別為33.12％（非誘導(dǎo)組）、23.82％（Fe2<’+>誘導(dǎo)組）、37.94％（H<,2>O<,2>誘導(dǎo)），對肝線粒體MDA生成抑制率達41.53％，使自由基誘導(dǎo)的小鼠肝線粒體腫脹度低于非誘導(dǎo)組；在體內(nèi)，碎米薺硒多糖小鼠的肝勻漿MDA生成率明顯低于對照生理鹽水組，全血和肝勻漿中GSH.PX活力明顯高于對照組。5碎米薺硒多糖的免疫活性研究 5.啐米薺硒多糖的免疫活性研究 分別以生理鹽水對照組、無機硒、CUS.P組、

7、硒+CUS－P組、CUS-SeP低劑量組、CUS-SeP中劑量組、CUS-SeP高劑量組設(shè)置試驗組；測定肝臟、脾臟重量并計算臟器系數(shù)；碳粒廓清法測定巨噬細胞吞噬功能：MTF法測定脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化功能；二硝基氟苯法測定遲發(fā)型超敏反應(yīng)；比色法測定脾細胞抗體的生成和血清溶血素含量；ELISA法測定免疫球蛋白中IgG含量。碎米薺硒多糖對小鼠的非特異性免疫、細胞免疫和體液免疫都有著顯著的影響，并且優(yōu)于同劑量的無機硒、碎米薺多糖及無機硒+碎米薺多糖組