人瘦蛋白基因在大腸桿菌中表達的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、瘦蛋白是肥胖基因在脂肪組織中表達的產(chǎn)物，是反映體內(nèi)脂肪組成及體內(nèi)脂肪含量和調節(jié)體重的重要信號因子。 本研究參考相關文獻設計引物，經(jīng)68℃退火及30輪循環(huán)的PCR程序后克隆了位于質粒載體上的瘦蛋白基因約460bp的片段，將該片段從瓊脂糖凝膠中回收，克隆在 pMD18-T測序載體中進行序列測定。 經(jīng)測序鑒定正確后，直接對重組的 pMD18-T-OB測序質粒進行雙酶切，并回收約 460bp的瘦蛋白基因片段，然后把回收產(chǎn)物與同樣

2、經(jīng)雙酶切的pET-28a(+)表達載體進行連接，連接產(chǎn)物轉化大腸桿菌感受態(tài)細胞后，挑選在抗性平板上生長的菌落進行液體培養(yǎng)并提取質粒進行雙酶切鑒定，從而最終獲得重組成功的表達質粒。 用構建的pET-28a(+)-OB重組表達質粒轉化大腸桿菌DH<,5a>及BL21(DE3)菌株，進行不同濃度IPTG、在不同時間下的誘導表達，然后對菌體蛋白進行SDS-PAGE分析，鑒定重組基因是否得到表達。結果表明，瘦蛋白在BL21(DE3)菌株中

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