人-鮭降鈣素嵌合基因在大腸桿菌中的串聯(lián)表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、降鈣素(Calcitonin，CT)是一種由32個氨基酸殘基組成的多肽類激素，它廣泛存在于哺乳動物的甲狀腺和魚類的后腮體中，其主要生理功能是參與體內(nèi)的鈣磷代謝，通過抑制破骨細(xì)胞的活性，促進鈣在骨中的沉淀，從而降低血鈣含量。天然降鈣素中鮭魚降鈣素(sCT)的活性最高，約為人降鈣素(hCT)的40倍。目前，鮭魚降鈣素已被廣泛應(yīng)用于臨床。 為保證降鈣素生物活性的同時盡量降低其在人體內(nèi)的抗原性，本實驗室人工合成了新型人/鮭降鈣素嵌合基因

2、(己申請專利)。為提高表達量，我們采用串聯(lián)表達的方法。首先設(shè)計一小段柔性連接肽，經(jīng)過SWISS-MODEL與3D-PSSM蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測，通過此短肽首尾相接的串聯(lián)CT中降鈣素的活性位點和抗原位點均可以得到充分暴露。因此，我們用同尾酶法構(gòu)建了多拷貝串聯(lián)基因表達質(zhì)粒pLEX-nCT(n=1，2，3，4，5)(每段CT基因之間以編碼連接肽的DNA連接)，并導(dǎo)入大腸桿菌GI724中表達。表達產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE檢測，1-5拷貝串聯(lián)CT基因的表

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