乳腺癌細(xì)胞系N-糖基化特征性糖鏈的分析.pdf

1、細(xì)胞質(zhì)膜是細(xì)胞與外界進(jìn)行物質(zhì)與信息交換的場所，近年來發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞表面糖蛋白是許多細(xì)胞質(zhì)膜功能重要的執(zhí)行者，其上的糖鏈作為生物信息分子參與了細(xì)胞生物幾乎所有的生物學(xué)過程，如細(xì)胞識別、粘附與融合、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫與應(yīng)答等方面都與糖鏈有關(guān)。糖蛋白糖鏈結(jié)構(gòu)的測定已成為臨床實驗室診斷疾病，尤其是腫瘤診斷的一個新的研究熱點。
　　本課題在基于DNA測序儀的熒光糖電泳（DSA-FACE）技術(shù)的基礎(chǔ)上，以乳腺癌細(xì)胞系為材料，比較分析了提取細(xì)胞膜蛋白和

2、細(xì)胞直接切糖技術(shù)兩種方法處理細(xì)胞后對細(xì)胞表面 N-糖鏈檢測的影響。結(jié)果顯示，完整細(xì)胞直接切糖法檢測到的糖鏈結(jié)構(gòu)無論從數(shù)目、豐度均顯著優(yōu)于提取細(xì)胞膜蛋白后切糖的方法，該方法結(jié)合 DSA-FACE技術(shù)，是一種可以實現(xiàn)簡單、經(jīng)濟(jì)、可靠的高通量細(xì)胞表面糖鏈結(jié)構(gòu)檢測方法，適用于體外培養(yǎng)細(xì)胞表面 N-糖鏈的研究，并為高通量的分析細(xì)胞表面糖鏈的結(jié)構(gòu)以及深入研究糖鏈生物學(xué)功能提供了新的思路。
　　利用建立的細(xì)胞直接進(jìn)行切糖方法，分析了乳腺細(xì)胞系M

3、CF-10A及5種乳腺癌細(xì)胞系 BT-549、MDA-MB231、MDA-MB435S、MCF-7、Bcap37的細(xì)胞表面 N-糖鏈結(jié)構(gòu)。發(fā)現(xiàn)正常乳腺細(xì)胞系與5種乳腺癌細(xì)胞系之間共同存在2種相同的N-糖鏈結(jié)構(gòu)，并發(fā)現(xiàn)這2個N-糖鏈的含量在不同細(xì)胞系間存在差異。我們通過將每種乳腺細(xì)胞系分別與MCF-10A乳腺細(xì)胞系相比，尋找到每個乳腺癌細(xì)胞系各自的特異性 N-糖鏈結(jié)構(gòu)，這些糖鏈的發(fā)現(xiàn)為研究來源不同的乳腺癌細(xì)胞系的生理學(xué)和病理狀態(tài)提供了新的

4、數(shù)據(jù)。
　　進(jìn)一步將乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞系 BT-549與MCF-10A進(jìn)行了對比分析，發(fā)現(xiàn)相同類型的細(xì)胞系的細(xì)胞表面 N-糖鏈結(jié)構(gòu)比較接近，并篩選出1號糖峰為乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞系的特異性糖鏈。同時還比較了3種乳腺腺癌細(xì)胞系 MDA-MB231、MDA-MB435S、MCF-7與MCF-10A之間的N-糖鏈差異，發(fā)現(xiàn)相對于乳腺腺癌細(xì)胞系，5號峰是正常乳腺細(xì)胞系的特異性糖鏈。同時通過對處于不同臨床分期的3種乳腺腺癌細(xì)胞系內(nèi)部之間的比較發(fā)現(xiàn)差異

5、較大，其中3號峰、6號峰僅在具有轉(zhuǎn)移特性的乳腺腺癌細(xì)胞系中檢測到，預(yù)示該峰可作為具有轉(zhuǎn)移特性的乳腺腺癌細(xì)胞系的特異性糖鏈。另外通過 MCF-10A與乳腺髓樣癌細(xì)胞系Bcap37比較發(fā)現(xiàn)，兩者細(xì)胞表面N-糖鏈結(jié)構(gòu)差異顯著，其原因可能是由于細(xì)胞類型不同而導(dǎo)致這種差異。
　　本研究建立了結(jié)合 DSA-FACE技術(shù)的細(xì)胞表面直接切糖方法，在此基礎(chǔ)上，通過對MCF-10A與不同類型的乳腺癌細(xì)胞系細(xì)胞表面糖鏈的比較，發(fā)現(xiàn)了MCF-10A及乳腺