鐵調(diào)素對(duì)小鼠成骨細(xì)胞(MC3T3-E1)成骨活性基因表達(dá)的影響.pdf

1、隨著我國(guó)“老齡化”的進(jìn)程不斷加快,骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病率愈來(lái)愈高。骨質(zhì)疏松癥是以骨組織顯微結(jié)構(gòu)受損,骨礦成分和骨基質(zhì)等比例不斷減少,骨質(zhì)變薄,骨小梁數(shù)量減少,骨脆性增加和骨折危險(xiǎn)度升高的一種全身骨代謝障礙的疾病。對(duì)于鐵代謝與骨代謝相關(guān)性研究始于21世紀(jì)初,國(guó)外學(xué)者研究主要基于:①在各種鐵代謝疾病患者中發(fā)現(xiàn)伴有骨代謝異常；②骨質(zhì)疏松患者伴有鐵代謝異常。目前已發(fā)現(xiàn)骨質(zhì)疏松癥與體內(nèi)“鐵過(guò)載”關(guān)系十分密切。
　　 近幾年關(guān)于鐵代謝與骨代謝的

2、研究越來(lái)越受到重視。而作為鐵代謝的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因素:鐵調(diào)素(Hepcidin),是近期發(fā)現(xiàn)的一種新型的由肝臟合成的小分子肽類激素,是機(jī)體鐵穩(wěn)態(tài)的主要調(diào)控者,主要在肝細(xì)胞中合成,之后分泌至血液將體內(nèi)鐵需要的信號(hào)傳至小腸,調(diào)控腸鐵的吸收。
　　 本課題中運(yùn)用鐵調(diào)素干預(yù)成骨細(xì)胞,觀察細(xì)胞的增殖活性情況及成骨細(xì)胞功能基因骨鈣素及骨保護(hù)素的變化。為進(jìn)一步闡明鐵的穩(wěn)態(tài)對(duì)于骨代謝紊亂疾病如骨質(zhì)疏松的影響,提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本研究主要分為以下三個(gè)部分:

3、
　　 第一部分：
　　 目的:研究鐵調(diào)素對(duì)小鼠成骨細(xì)胞MC3T3-E1細(xì)胞活性的影響。方法:小鼠MC3T3-E1細(xì)胞體外培養(yǎng)后,以不同濃度的鐵調(diào)素及Fe3+供體枸櫞酸鐵銨(FAC)、去鐵胺(DFO)分別作用24h、48h、72h,用MTT方法檢測(cè)成骨細(xì)胞的增殖情況。結(jié)果:MTT檢測(cè)顯示在不同濃度鐵調(diào)素干預(yù)后,隨著培養(yǎng)液鐵調(diào)素的增高,細(xì)胞生長(zhǎng)呈上升趨勢(shì),差異具有統(tǒng)計(jì)意義(P<0.05)。在培養(yǎng)液DFO濃度增高時(shí),細(xì)胞生長(zhǎng)

4、呈上升趨勢(shì)(P<0.05)。在培養(yǎng)液FAC濃度增高時(shí),細(xì)胞生長(zhǎng)呈顯著性下降(P<0.05)。結(jié)論:鐵調(diào)素促進(jìn)細(xì)胞增殖,DFO同樣促進(jìn)細(xì)胞增殖,而高濃度鐵劑(FAC)可抑制細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖,結(jié)果顯示有濃度依賴性。
　　 第二部分：
　　 目的:研究鐵調(diào)素對(duì)小鼠成骨細(xì)胞MC3T3-E1細(xì)胞骨保護(hù)素(OPG)和骨鈣素(BGP)基因表達(dá)的影響。方法:小鼠MC3T3-E1細(xì)胞體外培養(yǎng)后,以不同濃度(100nmol/ml,200nmo

5、l/ml,300nmol/ml)的鐵調(diào)素作用72h,用RT-PCR方法檢測(cè)OPG、BGP mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果:RT-PCR檢測(cè)顯示在不同濃度鐵調(diào)素干預(yù)后,各組均有OPG mRNA和BGPmRNA表達(dá)；不同濃度組的OPG mRNA和BGP mRNA表達(dá)光密度比值不同,組間密度比值比較存在顯著性差異(P<0.05)。結(jié)論:鐵調(diào)素可上調(diào)MC3T3-E1細(xì)胞OPG及BGP mRNA表達(dá),鐵調(diào)素濃度增加轉(zhuǎn)錄水平逐漸增加,結(jié)果顯示有濃度依賴性

6、。
　　 第三部分：
　　 目的:研究去鐵胺(DFO)對(duì)小鼠成骨細(xì)胞MC3T3-E1細(xì)胞骨保護(hù)素(OPG)和骨鈣素(BGP)基因表達(dá)的影響。方法:小鼠MC3T3-E1細(xì)胞體外培養(yǎng)后,以不同濃度(50μmol/L,100μmol/L)的去鐵胺作用48h,用RT-PCR方法檢測(cè)OPG、BGP mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果:RT-PCR檢測(cè)顯示在不同濃度去鐵胺干預(yù)后,各組均有OPG mRNA和BGPmRNA表達(dá)；不同濃度組的OPG