以絲素輕鏈基因片段為同源臂的家蠶基因打靶載體的構(gòu)建及應(yīng)用.pdf

1、家蠶(Bombyx mori)幼蟲具有一對(duì)發(fā)達(dá)的絹絲腺，能夠大量合成分泌絲蛋白，具有作為生物工廠的潛質(zhì)。為了利用絲素基因作為同源臂構(gòu)建家蠶基因打靶載體，通過(guò)PCR分別克隆了家蠶絲素輕鏈基因E5(89bp)I5(1060bp)E6(30bp)]片段和E7(406)以及3'-flank(98bp)］片段作為同源左右臂，并進(jìn)行了序列測(cè)定和分析，結(jié)果顯示，該2個(gè)片段與已公開的家蠶絲素輕鏈基因的對(duì)應(yīng)區(qū)域具有高度的同源性；利用家蠶絲素重鏈基因的左右

2、臂、絲素輕鏈基因啟動(dòng)子控制的人粒細(xì)胞一巨噬細(xì)胞集落刺激因子(hGM-CSF)表達(dá)盒以及家蠶A3啟動(dòng)子控制的報(bào)告基因 GFP 成功構(gòu)建了基因打靶載體FibL-L-A3GFP-En-[FH-GMCSF-PolyA]-FibL-R；該載體導(dǎo)入家蠶絲腺組織、家蠶培養(yǎng)細(xì)胞，可檢測(cè)到報(bào)告基因的表達(dá)。有關(guān)研究為通過(guò)基因打靶獲得絲腺特異性表達(dá)hGM-CSF的轉(zhuǎn)基因家蠶奠定了基礎(chǔ)。 在家蠶基因組克隆過(guò)程中還發(fā)現(xiàn)了一條950bp(BmMLE，EU3

3、52872)的、與類mariner元件有關(guān)聯(lián)的片段，BLAST搜尋結(jié)果顯示，該序列部分區(qū)域與野蠶mariner-like element DNA、家蠶acetylcholinesterase(ace)gene第5內(nèi)含子、11號(hào)染色體微衛(wèi)星S1104-R序列、BmBRC-NZ3基因終止碼下游序列、chorion early protein基因的內(nèi)含子序列具有很高的同源性，暗示家蠶類mariner元件在家蠶基因組中發(fā)生了多次轉(zhuǎn)座，并在家蠶基