肝癌中miR-203,miR-126的表達(dá)及miR-126的功能研究.pdf

1、目的:課題組前期對(duì)接受肝移植手術(shù)的肝癌患者腫瘤組織進(jìn)行microRNA表達(dá)譜分析,發(fā)現(xiàn)術(shù)后發(fā)生肝癌復(fù)發(fā)的的患者相對(duì)于未復(fù)發(fā)者miR-203、miR-126表達(dá)明顯下調(diào)。本研究在此基礎(chǔ)上,擴(kuò)大肝癌組織樣本對(duì)miR-203、miR0126表達(dá)進(jìn)一步驗(yàn)證,研究miR0126在肝癌轉(zhuǎn)移過程中的功能作用,并對(duì)miR-126影響肝癌轉(zhuǎn)移的機(jī)制作初步探討。
　　方法:1.TaqMan探針法Real-time PCR檢測(cè)miR-203、miR-1

2、26在68例肝癌中的表達(dá),綜合分析患者臨床病理資料和隨訪信息,探討miR-203、miR-126表達(dá)水平與肝癌臨床病理特征及患者預(yù)后的關(guān)系。2.構(gòu)建miR-126過表達(dá)慢病毒載體,病毒侵染肝癌SMMC-7721細(xì)胞,通過細(xì)胞遷移與侵襲實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞凋亡檢測(cè)、MTT實(shí)驗(yàn)和軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)研究miR-126對(duì)SMMC-7721細(xì)胞體外惡性生物學(xué)行為的影響;裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)觀察miR-126對(duì)SMMC-7721細(xì)胞體內(nèi)成瘤能力的影響,裸鼠尾靜脈

3、注射建立肺轉(zhuǎn)移模型分析miR-126對(duì)SMMC-7721細(xì)胞體內(nèi)轉(zhuǎn)移能力的影響。3.通過Liver Cancer PCR Array芯片了解miR-126對(duì)SMMC-7721細(xì)胞中肝癌相關(guān)基因表達(dá)的影響,初步探討miR-126影響肝癌轉(zhuǎn)移的機(jī)制。
　　結(jié)果:1.Real-time PCR結(jié)果表明miR-203、miR-126表達(dá)水平在移植術(shù)后肝癌復(fù)發(fā)組與未復(fù)發(fā)組有明顯差異(p＜0.05),相對(duì)于未復(fù)發(fā)組兩者在肝癌復(fù)發(fā)組均表達(dá)下調(diào)。

4、根據(jù)ROC曲線確定分類點(diǎn),按照miR-203和miR-126表達(dá)水平將患者分為高表達(dá)組和低表達(dá)組?？ǚ綑z驗(yàn)表明miR-203和miR-126表達(dá)水平與患者年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、術(shù)前AFP水平等臨床病理特征無明顯相關(guān)性。Kaplan-Meier生存分析表明miR-203和miR-126的低表達(dá)預(yù)示較低的總生存率和較高的腫瘤復(fù)發(fā)率(p＜0.05)。2.成功構(gòu)建miR-126過表達(dá)慢病毒載體,病毒侵染肝癌SMMC-7721細(xì)胞進(jìn)行體

5、內(nèi)、外功能實(shí)驗(yàn)。Transwell小室實(shí)驗(yàn)表明,miR-126過表達(dá)能降低肝癌細(xì)胞遷移和侵襲能力;流式細(xì)胞術(shù)分析發(fā)現(xiàn)miR-126過表達(dá)促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡;軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)表明miR-126過表達(dá)減少肝癌細(xì)胞集落形成數(shù)目;MTT實(shí)驗(yàn)顯示過表達(dá)miR-126明顯抑制SMMC-7721細(xì)胞增殖;體內(nèi)試驗(yàn)表明過表達(dá)miR-126的肝癌細(xì)胞在裸鼠皮下成瘤體積及重量均明顯小于對(duì)照組,尾靜脈注射過表達(dá)miR-126的肝癌細(xì)胞在肺臟形成轉(zhuǎn)移灶的比例明

6、顯小于對(duì)照組。3.Liver Cancer PCR Array芯片結(jié)果表明過表達(dá)miR.126能抑制SMMC-7721細(xì)胞中EGFR、PTGS2等基因的表達(dá),但具體機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。結(jié)論:1.miR-203、miR-126在肝癌中低表達(dá)預(yù)示移植術(shù)后較低的總生存率和較高的腫瘤復(fù)發(fā)率,提示miR-203和miR-126可作為肝癌肝移植病人預(yù)后的有效指標(biāo)。2.miR-126在體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)中能抑制肝癌轉(zhuǎn)移,有助于闡明肝癌進(jìn)展的分子機(jī)制,為提供