少陽生骨方對(duì)SD大鼠軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)增殖及II型膠原表達(dá)影響的研究.pdf

1、 目的：通過對(duì)比觀察少陽生骨方及鹽酸氨基葡萄糖膠囊含藥血清對(duì)大鼠體外關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞增殖、II型膠原蛋白達(dá)的影響,探討少陽生骨方保護(hù)損傷關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的效應(yīng)。方法：1.大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)體系的建立與鑒定：原代細(xì)胞應(yīng)用聯(lián)合酶消化法從1周齡SD大鼠關(guān)節(jié)軟骨獲取,并以倒置顯微鏡下觀察形態(tài)學(xué)表現(xiàn)及甲苯胺藍(lán)染色進(jìn)行鑒定；2. MTT比色法觀察少陽生骨方及鹽酸氨基葡萄糖膠囊含藥血清對(duì)大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞在體外培養(yǎng)增殖的影響；3.免疫組化法觀察少陽生骨

2、方及鹽酸氨基葡萄膠囊含藥血清對(duì)大鼠體外關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞II型膠原表達(dá)的影響。結(jié)果：1.采用聯(lián)合酶消化方法建立大鼠軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)體系,經(jīng)倒置顯微鏡下形態(tài)學(xué)觀察及甲苯胺藍(lán)染色鑒定,確認(rèn)分離培養(yǎng)的細(xì)胞符合軟骨細(xì)胞的生物學(xué)特征、形態(tài)學(xué)、組織化學(xué)染色顯示軟骨細(xì)胞培養(yǎng)傳3代以內(nèi)可以保持表型的穩(wěn)定。2.對(duì)軟骨細(xì)胞增殖的觀察顯示：少陽生骨方(SYSGF)5%、10%、20%含藥濃度的血清均能促進(jìn)體外正常軟骨細(xì)胞增殖,但增殖的效應(yīng)不隨濃度的遞增而增加,以1

3、0%的含藥血清濃度促進(jìn)正常培養(yǎng)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞增殖最為明顯,且在48時(shí)促進(jìn)增殖作用最佳。在第48h時(shí),對(duì)于正常培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞,10%SYSGF含藥血清組與10%空白血清組比較有顯著差異(P<0.05),與10%鹽酸氨基葡萄糖膠囊含藥血清組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),其增殖作用不及氨基葡萄糖膠囊；各組細(xì)胞的增殖效應(yīng)在第24h時(shí)較弱,第48時(shí)均強(qiáng)于第72h時(shí)。3.免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：各組標(biāo)本均可見II型膠原陽性表達(dá),表達(dá)部位為胞漿,可見