菟絲子在PC12細胞中的神經(jīng)活性及作用機制研究.pdf

1、以可持續(xù)增殖的細胞系細胞或低等動物為研究對象是一種快速而有效的藥物篩選方法.該文以利用中國豐富的天然藥物資源為目的,用大鼠嗜鉻神經(jīng)瘤細胞PC12作為模型,篩選能模擬NGF的功能誘導(dǎo)PC12細胞分化、對神經(jīng)細胞有一定保護作用的天然藥物,并對其作用機制進行初步探索.將菟絲子干粉用75﹪乙醇浸泡后,減壓蒸干后得到褐色漿狀物,經(jīng)石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,經(jīng)柱層析后,再用葡聚糖凝膠對有效成份進一步純化,獲得了菟絲子中能誘導(dǎo)PC12細胞分

2、化的活性組分.在0-50mg/L范圍內(nèi),菟絲子提取物能劑量依賴地誘導(dǎo)大鼠嗜鉻細胞瘤PC12細胞分化、延伸突起.神經(jīng)分化的PC12細胞在去血清后,會啟動細胞凋亡程序,細胞逐漸凋亡,甚至壞死.菟絲子提取物(0-20mg/L)能劑量依賴地抑制去血清引起的細胞凋亡,防止基因組DNA片段化,提高成活細胞的比例.通過比較活性氧作用細胞后的細胞活力、細胞周期、凋亡相關(guān)蛋白(p53、Bax、Bcl-2)水平以及細胞中SOD、GSH、MDA的差異,發(fā)現(xiàn)菟

3、絲子提取物對活性氧引起的細胞凋亡有一定的保護作用.它不僅能提高細胞活力,調(diào)節(jié)細胞中凋亡相關(guān)基因的表達,而且還能調(diào)控細胞分裂周期,提高神經(jīng)分化的PC12細胞中SOD和GSH的含量,降低MDA水平.這些結(jié)果表明,菟絲子提取物對去血清和活性氧等外界環(huán)境因素造成的細胞損傷有一定的保護作用.用不同濃度的菟絲子提取物作用大鼠嗜鉻細胞瘤PC12細胞,研究發(fā)現(xiàn)菟絲子提取物能誘導(dǎo)PC12細胞分化.菟絲子提取物處理后的PC12細胞形態(tài)分析、免疫組化和細胞周

4、期測定結(jié)果表明,菟絲子提取物不僅能抑制細胞分裂,誘導(dǎo)細胞分化、延伸大量突起,而且能促進神經(jīng)元再生信號蛋白GAP-43的大量表達,提高乙酰膽堿脂酶(Acetylcholinesterase,AChE)的活性.在低劑量的NGF和菟絲子提取物存在條件下,菟絲子提取物能明顯地增加NGF誘導(dǎo)的PC12細胞分化;但是,在高濃度的NGF存在下這種增強作用并不明顯.這說明菟絲子提取物可能通過一種不同于NGF的方式與PC12細胞作用,間接地活化NGF受體