HIF-1αsiRNA干擾缺氧誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞HIF-1α及血管生成因子的表達(dá).pdf

1、研究背景：在腫瘤的生長(zhǎng)過程中，血管生成起著關(guān)鍵的作用，它提供豐富的養(yǎng)分和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；并且為腫瘤的浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移創(chuàng)造條件。腫瘤細(xì)胞釋放的促血管生成因子作用于宿主內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)新血管的生成。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和酪氨酸激酶受體((KDR)在血管生成中起著重要作用。而血管的成熟和穩(wěn)定又主要靠酪氨酸受體另一種亞家族Tie2和其配體血管生成素(Angiopioetins)維持。這兩條信號(hào)傳導(dǎo)途徑是目前認(rèn)為最直接參與新血管生成的血管內(nèi)皮細(xì)胞特異的

2、途徑，在腫瘤的血管生成中相互作用。 缺氧是許多實(shí)體腫瘤的常見現(xiàn)象，是間質(zhì)血管系統(tǒng)無法滿足腫瘤生長(zhǎng)時(shí)出現(xiàn)。缺氧微環(huán)境使腫瘤細(xì)胞的一些基因和蛋白表達(dá)發(fā)生改變。這些變化使腫瘤細(xì)胞在適應(yīng)缺氧微環(huán)境的同時(shí)，也會(huì)導(dǎo)致腫瘤自身的生物學(xué)特性和表形的改變。在這個(gè)過程中轉(zhuǎn)錄因子H1F-l調(diào)節(jié)大量與之相關(guān)分子改變。己明確VEGF是HIF-l的重要靶基因之一。 肝癌具有生長(zhǎng)快、轉(zhuǎn)移早和死亡率高的特性：也是一種強(qiáng)的血管依賴性腫瘤。血管生成是其惡性

3、化的第一步，而眾多的促血管生成因子和抗血管生成因子參與了血管生成的過程。因此，以血管生成信號(hào)傳導(dǎo)通路為靶向的抗血管治療可能是一種很有潛力的抗腫瘤浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移和術(shù)后復(fù)發(fā)的治療方法。但是，在血管生成過程中，許多信號(hào)傳導(dǎo)分子機(jī)制目前還不清楚。RNA干擾(RNAinterference，RNAi)是近年興起的高效且特異特定基因的新技術(shù)，主要是將21bp的小干擾RNA(small refererlceRNA，siRNA)轉(zhuǎn)染進(jìn)細(xì)胞，通過序列特異的降

4、解作用，能有效封閉靶mRNA和降低蛋白質(zhì)水平。本研究采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶聯(lián)方法、蛋白印記方法、免疫組化方法和siRNA等方法研究肝癌組織和細(xì)胞中HIF-lα、VEGF、Angiopoietin-2的表達(dá)，目的是探索在肝癌中微環(huán)境缺氧與促血管生成細(xì)胞因子間作用的分子機(jī)理，并為肝癌治療尋找新的作用位點(diǎn)和治療途徑。目的：探討HIF-lα、VEGF、Angiopoietin-2在原發(fā)性肝細(xì)胞癌中的表達(dá)，以及與臨床病理因素及相互的關(guān)系。 方法

5、：用免疫組化法檢測(cè)43例原發(fā)性肝細(xì)胞癌中HIF-1α、VEGF、Angiopoietin-2的表達(dá)情況，探討HIF-1α、VEGF、Angiopoietin-2與肝癌血管生成等臨床病理因素的關(guān)系。另取7例正常肝組織作為對(duì)照。 結(jié)果：在43例肝癌標(biāo)本中，HIF-1α、VEGF、Angiopoietin-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)分別為: 60.5％、65.1％、79.1％。而7例正常的肝組織陽(yáng)性表達(dá)分別為：14.2％、14.2％、14.2％。

6、在肝癌組織中HIF-1α、VEGF、Angiopoietin-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)差異具有顯著性(P<0.05)，HIF-1α蛋白表達(dá)與腫瘤的大小、分化程度有關(guān)，VEGF蛋白表達(dá)與肝癌的分化程度、有無靜脈或膽道癌栓有關(guān)，Angiopoietin-2蛋白表達(dá)腫瘤的大小、有無門靜脈、膽道癌栓有關(guān)。HIF-lα、VEGF、Angiopoietin-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)呈正相關(guān)性。 結(jié)論： 1：HIF-1α在HCC中表達(dá)強(qiáng)于正常組織。HIF

7、-lα表達(dá)與腫瘤的大小、分化程度有關(guān)；而與HBsAg、門靜脈癌栓的有無無明顯相關(guān)性。 2：Angiopoietin-2僅在HCC中表達(dá)。其表達(dá)與分化程度、門靜脈癌栓有關(guān)；而與腫瘤的大小、HBsAg的有無無明顯相關(guān)性。 3：VEGF在ItCC中表達(dá)強(qiáng)于正常組織。其表達(dá)與腫瘤的大小、門靜脈癌栓有關(guān)；而與分化程度、HBsAg的有無無明顯相關(guān)性。 4．HCC組織存在著HIF-1α，Angiopoietin-2，VEGF蛋