SH-EP1-α4β2 nAChR-APP695細(xì)胞模型的建立及煙堿受體亞型特異性化合物對(duì)Aβ水平的影響及其機(jī)制.pdf

1、上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文SHEP1α4β2nAChRAPP695細(xì)胞模型的建立及煙堿受體亞型特異性化合物對(duì)Aβ水平的影響及其機(jī)制姓名：聶惠貞申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：藥理學(xué)指導(dǎo)教師：殷明20080601上海交通大學(xué)博士研究生學(xué)位論文型。在此細(xì)胞模型觀察a4132、IF型受體激動(dòng)對(duì)淀粉樣蛋白的影響及其機(jī)制；在機(jī)制研究的基礎(chǔ)上，建立BACEl基因啟動(dòng)子活性分析的方法，以期能找到可以用于亞型特異性抗阿爾茨海默病藥物高通量篩選的細(xì)胞模型。首先用脂

2、質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法在已經(jīng)穩(wěn)定表達(dá)外源a4132nAChR基因的SHEPl細(xì)胞轉(zhuǎn)染APP695基因，獲轉(zhuǎn)染后細(xì)胞單克隆共36株。用RTPCR的方法鑒定APP695在這36株單克隆中的表達(dá)，挑選出16株細(xì)胞克隆有APP695mRNA表達(dá)；進(jìn)一步從這16株表達(dá)APP695的細(xì)胞株中，挑選出4株同時(shí)表達(dá)煙堿科亞單位rnRNA和p2亞單位mRNA。用Westernblotting鑒定這4株細(xì)胞克隆APP695蛋白的表達(dá)，其中一株編號(hào)為1C8的細(xì)胞克隆

3、有較高APP695蛋白表達(dá)。用膜片鉗鑒定IC8細(xì)胞克隆株上a4p2nAChR受體功能，發(fā)現(xiàn)給予100gM煙堿，細(xì)胞膜出現(xiàn)內(nèi)向電流，證實(shí)細(xì)胞膜上的a4p2nAChR受體功能正常存在。這樣，本研究就成功建立了穩(wěn)定共表達(dá)a4132nAChR和APP695的SHEP1a4p2nAChRAPP695細(xì)胞模型。在SHEPla4132nAChRAPP695細(xì)胞模型進(jìn)行相關(guān)受體活性化合物實(shí)驗(yàn)，給予煙堿受體激動(dòng)劑煙堿(O1laM、1州)和a4p2亞型特異