解除EBV-TK基因沉默的初步探討.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文解除EBVTK基因沉默的初步探討姓名：潘藜婷申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：杜軍20070501解除EBV11[基因沉默的初步探討蛋白TK不同濃度的NaB與B958細(xì)胞共同孵育36h后，檢測細(xì)胞的EB病毒是否進入裂解期，并且表達裂解期蛋白TK，用Westemblot檢測TK蛋白的表達變化。2GCV對B958細(xì)胞的生長抑制作用聯(lián)合應(yīng)用NaB和GCV對B958細(xì)胞的生長抑制作用通過培養(yǎng)B958細(xì)胞，聯(lián)合應(yīng)用NaB

2、和GCv共同孵育細(xì)胞，B958細(xì)胞首先與NaB共孵育誘導(dǎo)24小時，讓TK表達，再與GCV共孵育，連續(xù)培養(yǎng)6天。設(shè)置對照組，觀察其效應(yīng)，是否有加強抑制細(xì)胞生長的效應(yīng)，使用MTT檢測細(xì)胞存活率。4探討解除B958細(xì)胞EBVTK基因沉默的機制往B958細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pcMVMEKKI、pCMVRafS621A、pCMVRasNl7、Aktldn，12小時后與濃度為2mmol的NaB共培養(yǎng)，誘導(dǎo)24小時后，再與濃度為100ug／mlGCV，連

3、續(xù)培養(yǎng)3天或6天。設(shè)置對照組。3天或6天后MTT檢測細(xì)胞存活率的改變。另外，B95—8細(xì)胞轉(zhuǎn)染質(zhì)粒48小時后，Westernblot檢測TK蛋白表達情況，設(shè)計陰性和陽性對照組。結(jié)果：1NaB對B95—8細(xì)胞EBVTK的激活作用呈一定的濃度依賴性，在NaB濃度為2mmol／L時能誘導(dǎo)B958細(xì)胞EBV進入裂解期，激活EBVTK的表達。通過NaB對B958細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)36小時，Westernblot檢測到可見的TK表達增高。2B958細(xì)胞與

4、不同濃度的OCV進行共孵育，單獨的GCV對B958細(xì)胞的殺傷作用不理想。GCV對B958細(xì)胞的殺傷作用呈一定的濃度依賴性，低濃度對B95—8細(xì)胞的殺傷作用并不明顯，當(dāng)達到100pg／ml時，對B95—8細(xì)胞的殺傷作用才開始顯現(xiàn)。B958細(xì)胞與不同濃度的CCV共培育6天后，MTT檢測結(jié)果顯示，當(dāng)GCV濃度為100Hg／ml時對細(xì)胞生長抑制為27r3％、200pg／ml為29，0％、400pg／ml為383％。3聯(lián)合應(yīng)用NaB和GCV與B9