特異性沉默EBV潛伏期基因BHRF1pSUPER retro RNAi系統(tǒng)的構(gòu)建和初步應(yīng)用.pdf

1、分類號：R 7 3 3密 級：X ．9 8 ／, ? 0 8單位代碼：1 0 4 2 2學(xué) 號：2 0 0 3 2 0 6 2 2⑧J ▲東兀番博士學(xué)位論文S h a n d o n gU n i v e r s i t yD o c t o r a lD i s s e r t a t i o n論文題目：特異性沉默E B V 潛伏期基因B H R F I p S U P E Rr e t r o R N A系統(tǒng)的構(gòu)建和初步應(yīng)用專指導(dǎo)

2、教師姓名 潘祥林羅兵2 0 0 6 年5 月 1 6 日山東大學(xué)博：I j 學(xué)位論文特異性沉默E B V 潛伏期基因B H R F l p S U P E R r e - [ ：r o R N A系統(tǒng)的構(gòu)建和初步應(yīng)用專業(yè)：內(nèi)科學(xué)( 血液腫瘤)博士研究生：孫萍導(dǎo)師：潘祥林教授羅兵教授摘 要E B 病毒( E p s t e i n —B a r rv i r u s ，E B V ) 是重要的D N A 致瘤病毒，與多種人類惡性腫瘤如B

3、u r k i t t 淋巴瘤、鼻咽癌( N P C ) 、何杰金氏病、免疫缺陷病人的B 淋巴細胞瘤、T 淋巴細胞瘤、胃癌及肝癌等的發(fā)生有關(guān)。研究表明在E B V 相關(guān)腫瘤組織中，E B V 只感染癌細胞而不感染正常細胞，而E B V陽性癌組織中，E B V 基因組存在于幾乎所有的癌細胞中，提示E B V 可能是治療E B V 陽性腫瘤的理想靶點，因此可以利用E B V 陽性腫瘤細胞與正常細胞的差異，采用適當(dāng)方法選擇性地殺傷E B V

4、陽性的腫瘤細胞。腫瘤組織中E B V 主要以潛伏感染的形式存在，不同E B V 相關(guān)腫瘤組織中病毒潛伏感染狀態(tài)不同，所表達的癌基因也不完全相同。E B V 潛伏膜蛋白基因L M P l 和核抗原基因E B N A 2 是公認的導(dǎo)致細胞惡性轉(zhuǎn)化的病毒癌基因。E B N A 2 為E B V 轉(zhuǎn)化B 淋巴細胞過程中最早表達的病毒編碼蛋白，通過增強細胞周期素D 2 的轉(zhuǎn)錄而活化細胞周期，并能增強L M P l 對原癌基因b c l 一2表達的

5、誘導(dǎo)作用。L M P 】高水平表達可誘發(fā)細胞癌變，在B 淋巴細胞的體外轉(zhuǎn)化中起重要作用，還可抑制人上皮細胞的分化，誘導(dǎo)人上皮細胞和大鼠細胞在裸鼠體內(nèi)形成腫瘤，并可通過激活A(yù) 2 0 基因阻斷p 5 3 介導(dǎo)的細胞凋亡，但某些E B V 陽性腫瘤中檢測不到L M P l 的表達。近年來E B V 早期基因B H R F l 的致癌作用亦逐漸受到關(guān)注。B H R F l 是E B V 裂解早期表達的蛋白，位于E B V 基因組第5 4 3

6、7 6 至5 4 9 5 l 位核苷酸區(qū)域，全長5 7 6 b p ，開放讀碼框有1 9 1 個密碼子，編碼l 7 k D a 的蛋白質(zhì)，屬于B c l ．2 家族。B H R F l與細胞原癌基因b c l ．2 的序列具有高度同源性，同源序列主要集中在兩者的B H l 、B H 2 區(qū)和C 末端。實驗表明B H R F l 除具有與b c l ．2 相似的抑制B淋巴細胞和上皮細胞凋亡的作用外，又具有b c l 一2 所沒有的促進細胞