中藥防治鴨疫里氏桿菌病的組方篩選及其抗菌機制的初步研究.pdf

1、鴨疫里氏桿菌(Riemerellaanatipestifer，Ra)病，也稱鴨傳染性漿膜炎，是鴨的一種細菌性傳染病。該病以纖維素性心包炎、氣囊炎、肝周炎、輸卵管炎、關(guān)節(jié)炎、腦膜炎等為主要病變特征，廣泛分布于世界各養(yǎng)鴨國家和地區(qū)，主要危害8周齡以內(nèi)的小鴨，3～4周齡的小鴨最易感染，死亡率最高可達70﹪，是造成養(yǎng)鴨業(yè)嚴重損失的主要傳染病之一。Ra菌有21個血清型，不同血清型之間缺乏交叉保護能力，且Ra對各類抗生素極易產(chǎn)生耐藥性，在很多地區(qū)已

2、經(jīng)難以找到對Ra敏感的藥物。因此，本課題探索采用中藥防治鴨疫里氏桿菌病，并初步研究了其抗菌機制。 遵循中醫(yī)學(xué)辨證施治原則，根據(jù)鴨疫里氏桿菌病的臨床癥狀和病理表現(xiàn)，共選擇中藥25昧，從中組方4個，同時使用單味藥7個。將單味中藥和各組方的水煎劑采用紙片擴散法進行抗鴨疫里氏桿菌病的體外抑菌試驗；采用將小鴨人工發(fā)病，再以飲水法給藥，進行體內(nèi)治療試驗。結(jié)果顯示，黃連藥敏紙片對I型、II型Ra細菌均具有極好的體外抑菌效果，但對人工發(fā)病后的小

3、鴨無治療效果；黃柏具有輕微的體外抑菌效果；4個組方中僅有“黃連漿膜炎湯”(CISD)在體外具有良好的抑菌效果，最小抑制鴨疫里氏桿菌的生藥濃度為0．088×2—4pdml，完全抑制鴨疫里氏桿菌增殖的生藥濃度為0．088×2～g/ml，藥物抑制細菌增殖效果和藥物濃度呈正相關(guān)；其對人工發(fā)病鴨的有效治療藥物濃度為0．088×2—2g/ml，存活率達到90﹪，而對照組的耐過率為52﹪，兩者相比藥物治療效果十分顯著。 在篩選出防治RA病藥物

4、的基礎(chǔ)上，研究了黃連漿膜炎湯(CoptidisrhizomaInfectiousSerositisDicoction，CISD)對鴨疫里氏桿菌的體外最小抑制濃度，在亞抑菌濃度下用電鏡觀察了細菌的形態(tài)變化。將CISD水提醇沉后，減壓濃縮，倍比稀釋制成0．088g／mi，0．088×2一~g/ml，0．088×2—2g／mi……0．088×2一l~g/ml等梯度濃度，以紙片擴散法和試管法測定CISD的最小抑菌濃度，用紫外可見分光光度計在60

5、0nm波長下測定試管肉湯的OD值；取0．088g／mi和0．088×2—3g/ml藥物濃度組分別作用17h和3、6、17h后的細菌在透射電鏡下進行形態(tài)觀察。結(jié)果：無論紙片法還是試管法均在0．088×2—4g/ml濃度組下為最小抑制濃度；藥物作用后細菌菌體完整，但長度變長，菌內(nèi)皺褶減少，紋理變得不均勻，部分區(qū)域隆起，有些細菌發(fā)生卷曲或折疊等。藥物可能通過破壞細菌結(jié)構(gòu)達到抑制細菌增殖的目的。 同時研究了CISD在體內(nèi)外對鴨淋巴細胞增

6、殖的影響，從免疫學(xué)角度研究其治療RA病的作用機理。采用MTT法，在鴨體內(nèi)外給藥后，用酶標儀在570nm下測定各試驗和對照組C02箱培養(yǎng)后的淋巴細胞吸光值。結(jié)果顯示，小鴨體內(nèi)給藥2d后，CISD單獨或?qū)τ蒀onA和PMA刺激的鴨脾臟、法氏囊淋巴細胞增殖均無影響(P>0．05)；體外給藥，在3個濃度范圍內(nèi)，CISD單獨或?qū)τ蒔MA誘導(dǎo)的鴨脾臟B淋巴細胞增殖產(chǎn)生抑制作用(尸<0．05)，對ConA誘導(dǎo)的脾臟T淋巴細胞增殖作用無影響(P>0．0

7、5)；CISD體外單獨給藥或合并PMA和ConA，對鴨法氏囊淋巴細胞增殖無影響(尸>0．05)。以上結(jié)果表明，CISD在體外不僅能夠單獨抑制鴨脾臟B淋巴細胞增殖，而且抑制由ConA或PMA誘導(dǎo)的淋巴細胞增殖作用，尤其對PMA誘導(dǎo)的淋巴細胞增殖抑制作用顯著。CISD抑制鴨淋巴細胞增殖，進而通過抑制由淋巴細胞分泌的炎性細胞因子增殖途徑達到減輕鴨病理和臨床癥狀的目的，起到治療保護的作用。 在實驗室研究的基礎(chǔ)上進行了野外臨床試驗。證實C