桑葉提取物中黃酮類化合物在大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)研究.pdf

1、桑葉為桑科植物桑(Morus alba L.)的樹葉，為傳統(tǒng)的中藥材之一，廣泛地應(yīng)用在現(xiàn)代醫(yī)藥和食品領(lǐng)域。黃酮類化合物是桑葉中一類重要的有效成分，具有抗菌、降血壓、清除自由基、抑制血清脂質(zhì)增加和抑制動脈粥樣硬化形成的作用，并與桑葉中的多糖、生物堿等成分在降血糖活性方面有一定的協(xié)同作用，是評價桑葉藥材質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)之一。鑒于其豐富的生理和藥理作用，除作為中藥材應(yīng)用于臨床外，桑葉也被加工成各種保健品熱銷各國。但不同來源的桑葉提取物，黃酮類化合物

2、的含量有一定差異。文獻(xiàn)對不同產(chǎn)地、不同品種和不同季節(jié)采收的桑葉中的黃酮類成分的測定和效應(yīng)成分的藥理作用，如抗菌、抗氧化、降血糖、降血脂等有較多報道，但對桑葉提取物的質(zhì)量評價和有效成分的藥動學(xué)研究報道缺乏，因此對桑葉提取物的主要藥效成分之一黃酮類化合物進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)控及其在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)行為進(jìn)行研究顯得十分必要，有助于桑葉藥材及桑葉提取物的質(zhì)量控制和具體效應(yīng)成分的生物利用度研究。
　　 本文首先對桑葉提取物進(jìn)行酸水解，以正交試驗

3、設(shè)計優(yōu)選出酸水解的最佳條件，即鹽酸濃度2.0 mol-L-1、水解溫度90℃、水解時間60min。然后以HPLC法測定槲皮素和山萘酚的含量，從而達(dá)到對桑葉提取物中黃酮類化合物的含量進(jìn)行控制的目的。在此基礎(chǔ)上，本文建立了大鼠血漿中槲皮素、山萘酚及異鼠李素的總濃度的測定方法，并利用所建立的方法測定了大鼠口服桑葉提取物后血漿中藥物濃度隨時間的變化，應(yīng)用DAS3.0軟件，分析了血漿中槲皮素、山萘酚、異鼠李素的藥代動力學(xué)特征，為進(jìn)一步以桑葉為原料

4、開發(fā)藥物和保健品提供一定的理論依據(jù)。
　　 1.桑葉提取物中黃酮類化合物的測定
　　 目的：建立HPLC法測定桑葉提取物中水解產(chǎn)物槲皮素和山萘酚的含量，從而達(dá)到對桑葉提取物中黃酮類化合物的含量進(jìn)行控制的目的。
　　 方法：取桑葉提取物25mg，精密稱定，加20mL鹽酸甲醇溶液使之溶解，并使反應(yīng)體系中鹽酸終濃度為2.0mol-L-1、甲醇終濃度為50％(v/v)，水浴回流，使桑葉提取物中主要黃酮苷類成分水解為槲皮素

5、和山萘酚，以HPLC法測定槲皮素和山萘酚含量。色譜柱為Diamonsil鉆石C18柱(4.6mmx250mm，5μm)：流動相為甲醇-0.2％磷酸(63：37，v/v)；流速為1.0mL·min-1；檢測波長為370nm。
　　 結(jié)果：槲皮素在0.84-26.8 mgL-1之間，山萘酚在0.44-14.2mg-L-1之間呈良好的線性關(guān)系(r=0.9999，0.9999，n=6)：日內(nèi)、日間精密度以RSD計分別小于1.8％，2.3

6、％；加樣回收率分別為97.0-103.4％，97.3-103.2％。
　　 結(jié)論：HPLC法測定桑葉提取物中水解產(chǎn)物槲皮素和山萘酚的含量方法準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于桑葉提取物中黃酮類化合物的質(zhì)量控制。測定結(jié)果表明，本研究桑葉提取物中水解產(chǎn)物槲皮素和山萘酚的含量分別為5.98士0.12％，1.98士0.04％.不同批次的桑葉提取物之間含量差別并不大。
　　 2.桑葉提取物中黃酮類化合物在大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)研究
　　 目

7、的：建立大鼠血漿中測定槲皮素、山萘酚及異鼠李素的濃度的高效液相色譜法，并研究大鼠口服桑葉提取物(Folium Mori Extract，簡稱FME)后血漿中效應(yīng)成分-槲皮素、山萘酚及其代謝產(chǎn)物疑似異鼠李素(對這一名詞的解釋見第二章3.9)的藥代動力學(xué)特征。
　　 方法：精密移取大鼠血漿100.0μL，加入內(nèi)標(biāo)物木犀草素9.0μL，在3mol-L-1鹽酸條件下于90℃水浴中水解60min，水解后置于冰水中冷卻，并精密加入乙醚-丙酮

8、混合液(14：1，v/v)1.5mL，進(jìn)行漩渦萃取，萃取液減壓揮干后加50％的甲醇溶解，超高速離心后取75μL上層清液進(jìn)樣分析。采用AgilentZorbaX SB-C18色譜柱，以甲醇-0.2％磷酸(50：50，v/v)為流動相，流速1.0mL·min-1，檢測波長370nm，柱溫37℃。大鼠口服106mg·kg-1桑葉提取物后，收集給藥前及給藥后不同時間點血漿，以所建立的方法測定各時間點血漿中槲皮素、山萘酚和疑似異鼠李素的濃度，并根

9、據(jù)所測定的濃度得出藥物濃度-時間曲線，用DAS3.0軟件計算三者的藥代動力學(xué)參數(shù)。
　　 結(jié)果：槲皮素、山萘酚和異鼠李素分別在0.060-2.40mg·L-1，0.105-4.20mg·L-1和0.060-2.40mg·L-1內(nèi)呈良好線性關(guān)系，r分別為1.000，0.9991和0.9908；提取回收率分別在74.6-93.6％，81.7-85.6％，68.4-80.4％之間；方法回收率分別在96-103％，103-108％，87

10、-108％之間。日間及日內(nèi)精密度RSD均小于13.9％。大鼠灌胃給藥FME后，血藥濃度出現(xiàn)雙峰現(xiàn)象；槲皮素、山萘酚和疑似異鼠李素分別于0.333h、0.333h、0.667h左右達(dá)第一個峰；4h、6h及6h左右達(dá)第二個峰；槲皮素、山萘酚和疑似異鼠李素的t1/2z分別為66.8h、42.3h、64.2h，Cmax分別為1.21 mg·L-1、1.79 mg·L-1、0.325 mg·L-1。
　　 結(jié)論：高效液相色譜法測定大鼠血漿