表皮生長因子受體抑制劑AG1478對人膠質(zhì)瘤細胞影響的實驗研究.pdf

1、目的:研究表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)酪氨酸激酶抑制劑Tyrphostin AG1478對人腦膠質(zhì)瘤U87細胞增殖、細胞周期、細胞凋亡、細胞侵襲和遷移能力的影響,觀察AG1478對人膠質(zhì)瘤U87細胞化學治療敏感性的影響,并探討AG1478對膠質(zhì)瘤細胞生物學行為影響的相關(guān)機制,為AG1478作為一種新的腫瘤治療藥物在控制人膠質(zhì)瘤細胞生長、侵襲、轉(zhuǎn)移和化學治療增敏的應(yīng)用上提供

2、實驗基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　方法:(1)應(yīng)用MTT(噻唑藍)比色法檢測不同濃度AG1478和AG1478聯(lián)合CDDP作用于體外培養(yǎng)的人腦膠質(zhì)瘤U87細胞24h和48h后的細胞生存率。(2)流式細胞儀檢測不同濃度AG1478和AG1478聯(lián)合CDDP作用于體外培養(yǎng)的人腦膠質(zhì)瘤U87細胞24h和48h后細胞周期分布和細胞凋亡的影響。(3)Transwell小室體外侵襲實驗檢測AG1478對人腦膠質(zhì)瘤U87細胞體外侵襲和轉(zhuǎn)移能力的影響。(

3、4)明膠酶譜法檢測AG1478對人腦膠質(zhì)瘤U87細胞MMP-2、MMP-9蛋白表達水平的影響;(5)Western印跡法檢測CDDP和AG1478對人腦膠質(zhì)瘤U87細胞EGFR信號通路分子蛋白(EGFR/p-EGFR、AKT/p-AKT、ERK/p-ERK)以及細胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表達的影響。
　　結(jié)果:(1)AG1478明顯抑制體外培養(yǎng)的人膠質(zhì)瘤U87細胞增殖,并呈時間和濃度依賴性,并可以阻斷EGF促進人膠質(zhì)瘤

4、 U87細胞增殖的作用。(2)AG1478可以誘導人膠質(zhì)瘤U87細胞發(fā)生凋亡;阻滯細胞于G0-G1期,呈濃度依賴性。(3)AG1478可以抑制人膠質(zhì)瘤U87細胞體外侵襲和遷移能力。(4)AG1478抑制人膠質(zhì)瘤U87細胞p-EGFR/EGFR、p-AKT/AKT、p-ERK/ERK、MMP-2、MMP-9和CyclinD1蛋白的表達。(5)CDDP具有EGF促進人膠質(zhì)瘤U87細胞EGFR、ERK和AKT蛋白磷酸化的作用,AG1478可以

5、阻斷EGF和CDDP對人膠質(zhì)瘤U87細胞EGFR信號通路分子活化的作用。(6)AG1478通過增加S期細胞數(shù)和抑制CDDP活化人膠質(zhì)瘤U87細胞EGFR信號通路活化而增強CDDP對膠質(zhì)瘤細胞生長的抑制作用。
　　結(jié)論:AG1478通過誘導人膠質(zhì)瘤U87細胞凋亡,阻滯細胞周期進程,阻斷細胞EGFR信號傳導通路、下調(diào)MMP-2、MMP-9和CyclinD1蛋白的表達來抑制體外人膠質(zhì)瘤U87細胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力,AG1478還增強人