吉非替尼治療非小細胞肺癌的臨床療效和預測因素分析及其致肺纖維化作用的實驗研究.pdf

1、目的：(1)評價吉非替尼治療中晚期非小細胞肺癌(NSCLC)患者的療效。(2)檢測接受吉非替尼治療的中晚期NSCLC患者腫瘤組織標本中表皮生長因子受體(EGFR)酪氨酸激酶區(qū)域、K-RAS基因的突變情況以及P16基因啟動子區(qū)的甲基化狀態(tài)，分析EGFR、K-RAS基因突變、P16基因啟動子區(qū)甲基化與吉非替尼療效之間的關系。(3)探討吉非替尼對博萊霉素誘導的小鼠肺纖維化模型的影響及其作用機制。 方法：(1)29例經病理證實的中晚期N

2、SCLC患者，口服吉非替尼250mg/日治療，療效評價采用RECIST標準。(2)回顧性收集29例患者的石蠟腫瘤組織標本，提取組織標本的DNA，PCR方法擴增EGFR基因18-21外顯子、K-RAS基因外顯子2，甲基化特異性PCR方法擴增P16基因啟動子區(qū)，擴增結果行測序檢測EGFR基因和K-RAS基因的突變情況以及P16基因啟動子區(qū)的甲基化水平，分析EGFR、K-RAS基因突變、P16基因啟動子區(qū)甲基化與吉非替尼療效之間的關系。(3)

3、將C57BL/6小鼠分為四組：鹽水+鹽水組，鹽水+吉非替尼組，博萊霉素+鹽水組，博萊霉素+吉非替尼組。經氣管滴注博萊霉素的方法誘導小鼠肺纖維化模型的形成。分別于14天和21天兩個時間點取小鼠標本進行分析。采用HE染色、MASSON染色和p-EGFR、S100A4的免疫組化染色對小鼠標本行病理學評價，使用實時定量PCR的方法分析小鼠標本中E-cadherin、CollagenⅠ、CollagenⅢ的含量以及western blot的方法測

4、定p-EGFR、S100A4和β-actin的蛋白量表達水平。 結果：(1)本研究中共有29例經病理證實的中晚期NSCLC患者接受吉非替尼口服治療，患者的客觀腫瘤緩解率為37.9％，疾病控制率為72.4％，平均無進展生存期(PFS)為10.0個月，平均總體生存期(OS)為16.8個月，1年生存率為51.7％。吉非替尼的療效與患者的性別、病理類型及吸煙情況顯著相關(P＜0.05)。共有23例(79.3％)患者出現(xiàn)吉非替尼治療的副作

5、用，副作用主要表現(xiàn)為Ⅰ/Ⅱ度的皮疹(65.5％)和腹瀉(27.6％)，入組的29例患者無一例發(fā)生間質性肺炎等嚴重并發(fā)癥。(2)患者腫瘤組織標本的突變檢測發(fā)現(xiàn)11例患者(37.9％)攜帶有EGFR基因突變，4例患者(13.8％)帶有K-RAS基因突變．EGFR基因突變與患者的吉非替尼治療療效之間呈正相關關系(P＜0.05)，對患者吉非替尼治療后總體生存期的延長有顯著性意義。K-RAS基因突變與患者吉非替尼療效之間呈負相關關系(P＜0.05

6、)，對患者吉非替尼治療后無進展生存期和總體生存期的縮短有統(tǒng)計學意義。在P16基因的甲基化檢測中，15例患者(55.6％)被檢測到有P16基因啟動子區(qū)的高甲基化，但P16基因的甲基化水平與患者的臨床特征及吉非替尼療效之間沒有相關關系。(3)HE染色與MASSON染色結果顯示：鹽水+吉非替尼組的病理表現(xiàn)與鹽水+鹽水組相似，吉非替尼沒有誘導出明顯的肺纖維化表現(xiàn)；博萊霉素+鹽水組的肺纖維化程度高于博萊霉素+吉非替尼組。免疫組化染色結果顯示：博萊

7、霉素+吉非替尼組的p-EGFR和S100A4的表達量低于博萊霉素+鹽水組。實時定量PCR分析結果表明，鹽水+吉非替尼組的膠原Ⅰ和膠原Ⅲ的含量與鹽水+鹽水組無差異；博萊霉素+鹽水組膠原Ⅰ和膠原Ⅲ的表達量在21天時明顯增高；而與博萊霉素+鹽水紐相比，博菜霉素+吉非替尼組的膠原Ⅰ和膠原Ⅲ的含量呈下降趨勢，E-cadherin在各組間的表達量沒有顯著性差異。western blot分析結果表明，β-actin的表達量在各組間無差異；鹽水+鹽水組

8、與鹽水+吉非替尼組p-EGFR和S100A4的表達量無差異；博萊霉素+吉非替尼組p-EGFR蛋白表達水平低于博萊霉素+鹽水組，博萊霉素+吉非替尼組S100A4的表達量與博萊霉素+鹽水組差異不明顯。 結論：(1)吉非替尼對于二線化療失敗的中晚期NSCLC患者有效且患者耐受性較好。(2)EGFR基因突變與患者吉非替尼的療效有正相關關系。K-RAS基因突變與患者吉非替尼的療效呈負相關關系。P16基因啟動子區(qū)的高甲基化與患者吉非替尼療效