羽扇豆醇對人NK細(xì)胞殺傷胃癌細(xì)胞的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討羽扇豆醇對人NK細(xì)胞殺傷胃癌細(xì)胞的影響及機(jī)制。
　　方法：采集健康志愿者外周血100 ml，淋巴細(xì)胞分離液分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)，在體外經(jīng)多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)培養(yǎng)NK細(xì)胞。不同濃度的羽扇豆醇分別作用于NK細(xì)胞和不同分化類型的胃癌HGC27（未分化）、BGC823（低分化）、N87（高分化）細(xì)胞24 h、48 h及72 h后:CCK8法檢測羽扇豆醇對NK細(xì)胞生長的影響;四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測羽扇豆醇對胃癌細(xì)胞

2、生長的影響。不同濃度羽扇豆醇作用72 h后:流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測NK細(xì)胞顆粒酶B、穿孔素、CD107a、NKG2D、IFN-γ的表達(dá);乳酸脫氫酶(LDH)釋放法檢測NK細(xì)胞對胃癌BGC823、N87、HGC27細(xì)胞的殺傷活性;Westernblot法檢測NK細(xì)胞p-ERK1/2、Akt、p-Akt、Bcl-2、β-catenin的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：(1)NK細(xì)胞培養(yǎng): PBMC經(jīng)上述誘導(dǎo)培養(yǎng)10天后，NK細(xì)胞(CD3-CD

3、56+)的比例由6.31％增加到78.09％。(2)羽扇豆醇對NK細(xì)胞增殖的影響:與對照組比較，作用24 h、48 h及72 h后，濃度為0.4～100μmol/L羽扇豆醇組NK細(xì)胞的增殖率增高(P＜0.05);同一濃度羽扇豆醇作用后，72 h組NK細(xì)胞的增殖率最高，與24 h、48 h組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，相關(guān)分析結(jié)果顯示NK細(xì)胞增殖率呈時(shí)間依賴性（r=0.903）;同一作用時(shí)間，濃度25μmol/L的羽扇豆醇組NK細(xì)胞

4、增殖率最高，與其他濃度組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(3)羽扇豆醇對胃癌細(xì)胞增殖的影響:經(jīng)濃度0.1～200μg/ml羽扇豆醇作用后，胃癌BGC823、N87、HGC27細(xì)胞抑制率均較對照組顯著增高(P＜0.05)，且隨羽扇豆醇濃度增加，抑制率逐漸升高;與24 h、48 h組比較，72 h組羽扇豆醇僅對胃癌BGC823細(xì)胞的抑制作用有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。相關(guān)分析結(jié)果顯示羽扇豆醇對胃癌BGC823細(xì)胞抑制率呈濃度-時(shí)間依賴性

5、，對胃癌N87、HGC27細(xì)胞抑制率呈濃度依賴性。(4)羽扇豆醇對NK細(xì)胞功能的影響:3.1～12.5μmol/L濃度羽扇豆醇作用72 h后NK細(xì)胞PFP、IFN-γ、CD107a表達(dá)率較對照組顯著增加(P＜0.05)，GraB、NKG2D的表達(dá)率與對照組無明顯差異（P＞0.05）。相關(guān)分析表明，不同濃度羽扇豆醇作用72 h后的NK細(xì)胞其PFP、IFN-γ與CD107a的表達(dá)呈顯著相關(guān)(r1=0.965，r2=0.952)。(5)羽扇豆

6、醇對NK細(xì)胞殺傷胃癌細(xì)胞的影響:①1.6～50μg/ml濃度羽扇豆醇作用于胃癌細(xì)胞72 h后，NK細(xì)胞對胃癌HGC27細(xì)胞的殺傷活性較對照組顯著升高(P＜0.05)，12.5μg/ml濃度組殺傷活性達(dá)高峰，與其他組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05); NK細(xì)胞對胃癌BGC823、N87細(xì)胞的殺傷活性作用前后沒有明顯變化。②濃度1.6～12.5μg/ml羽扇豆醇作用72 h后，NK細(xì)胞對3株胃癌細(xì)胞的殺傷活性隨羽扇豆醇濃度增加逐漸升高

7、，12.5μg/ml時(shí)達(dá)最高峰;濃度6.25μg/ml和12.5μg/ml羽扇豆醇組，NK細(xì)胞對3株胃癌細(xì)胞的殺傷活性均顯著高于對照組(P＜0.05)，且12.5μg/ml組與其他組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(6)羽扇豆醇對NK細(xì)胞蛋白表達(dá)的影響:濃度6.25μmol/L和12.5μmol/L羽扇豆醇作用后，NK細(xì)胞p-Akt、β-catenin表達(dá)較對照組顯著增加(P＜0.05)，且6.25μmol/L濃度與其余濃度組組