天然三倍楷杷基因表達(dá)倍性效應(yīng)的cDNA-AFLP研究.pdf

1、三倍體枇杷在生長勢、枝條粗度、葉片大小和厚度、葉片組織結(jié)構(gòu)、花器官及果實(shí)特性等方面表現(xiàn)出較明顯的優(yōu)勢,其無核性狀顯著提高了果實(shí)的可食率,其基因表達(dá)和調(diào)控機(jī)制尚無研究。
　　 本試驗(yàn)以同源三倍體枇杷品種單株“森尾早生”和“常白一號”的嫩葉、花蕾和幼果為材料,并以其相應(yīng)的二倍體嫩葉、花蕾和幼果為對照采用LiCl-CTAB的方法提取總RNA,合成cDNA雙鏈,以此為模板進(jìn)行AFLP分析,對差異片段進(jìn)行回收、克隆,經(jīng)測序后進(jìn)行同源性比對

2、分析。研究結(jié)果如下:
　　 (1)從20對引物組合中選出了14對引物組合進(jìn)行擴(kuò)增,共得到3695條帶,其中篩選獲得148條差異表達(dá)轉(zhuǎn)錄衍生片段(TDF),約占總擴(kuò)增條帶的4%。
　　 (2)同源三倍體枇杷只有約1%左右的位點(diǎn)發(fā)生了變化,且在不同器官中位點(diǎn)的表達(dá)變化存在差異。即嫩葉沉默位點(diǎn)多于激活位點(diǎn),花蕾激活位點(diǎn)多于沉默位點(diǎn),而在幼果中表現(xiàn)不規(guī)律性。
　　 (3)同一位點(diǎn)在不同三倍體單株中的多態(tài)性表達(dá)存在差異,獲

3、得的148個TDF在三倍體枇杷各器官的表達(dá)以基因沉默為主。
　　 (4)148個差異基因片段的序列在NCBI中進(jìn)行Blastx功能分析,涉及轉(zhuǎn)錄調(diào)控、代謝過程、抗病性、信號傳導(dǎo)、蛋白質(zhì)合成與降解、細(xì)胞組分、未命名蛋白或預(yù)測蛋白等功能,還包括一些未找到同源序列和同源性較低的序列。
　　 (5)同源三倍體枇杷中表現(xiàn)出基因激活且同源性較高的差異片段分別為TDF1、TDF27、TDF42、TDF46、TDF47、TDF53、TD

4、F93、TDF109、TDF117,未找到同源序列或同源性較低的序列為TDF60、TDF82、TDF91、TDF95、TDF101、TDF102、TDF107、TDF116、TDF136、TDF142,編號依次為A1-A10(A-activation)。
　　 (6)同源三倍體枇杷中表現(xiàn)出基因沉默的差異片段分別為TDF10、TDF51、TDF70、TDF85、TDF103、TDF110、TDF112、TDF120、TDF121、