水溶性水溶性海星皂苷的分離純化及其抗真菌活性研究

1、水溶性海星皂苷的分離純化及其抗真菌活性研究水溶性海星皂苷的分離純化及其抗真菌活性研究何穎北京化工大學北方學院化藥1107摘要摘要：為了分離純化出具有強抗真茵活性的水溶性海星皂苷，以羅氏海盤車(Aster／asroUeston／)腕為實驗材料，利用水抽提方法獲得水溶性海星皂苷粗品，依次利用大孔樹脂和硅膠柱層析對水溶性海星皂苷進行了純化，并對其抗真茵活性進行了測定。研究結果發(fā)現，在30％、50％、70％、80％、95％乙醇溶液的大孔樹脂柱層

2、析洗脫組分中，70％乙醇溶液洗脫組分對白色念珠茵和裂殖酵母菌的抗真菌活性最強。70％乙醇溶液洗脫組分經硅膠柱層析進一步純化后，得到了SF1、SF2、SF3和SF4四種純化樣品，其中SFI純化樣品沒有抗真菌活性，SF2純化樣品具有極弱的抗真茵活性，SF3和SF4純化樣品均具有很強的抗真菌活性。SF3純化樣品在高壓液相柱層析(HPLC)圖譜中僅顯示單一洗脫峰，表明其純度很高，可應用于高效抗真菌藥物的研制。研究結果為利用水溶性海星皂苷研制高效

3、抗真菌藥物奠定了基礎。關鍵詞關鍵詞：海星；水溶性海星皂苷；抗真菌活性；大孔樹脂柱層析；硅膠柱薄層層析皂苷，又稱皂甙，是一種廣泛存在于植物以及海洋棘皮動物中的、具有多種藥理學活性的物質。海星皂苷是海星的次生代謝產物，對純的海星皂苷的大量試驗表明它們具有多種藥理活性：溶血活性、腫瘤細胞毒性、抗病毒作用、抗革蘭氏陽性菌活性、阻斷哺乳動物神經肌肉傳導作用、Na／KATP酶抑制作用、抗?jié)冏饔靡约翱寡住⒙樽砗徒笛獕夯钚缘取?。目前，對海星皂苷的制?/p>

4、多采用甲醇、乙醇等稀醇提取法協(xié)3J，這種工藝方法冗長復雜、萃取率低H】，存在著有機溶劑使用量大、成本高、容易對環(huán)境造成污染等一系列缺點∞1；同時提取的海星皂苷水溶性比較差，應用時常需用促溶劑如DMSO等對其進行溶解，這在一定程度上影響了其抗真菌活性，也限制了其在臨床醫(yī)學上的應用范圍。到目前為止，國內外尚未見到對水溶性海星皂苷的報道極少，更沒有利用水溶性海星皂苷進行抗真菌活性的研究報道。本文利用水抽提法、大孔樹脂柱層析和硅膠柱層析從羅氏海

5、盤車(Aster／asrollestoni)腕中分離并純化出水溶性海星皂苷，篩選出具有顯著抗真菌活性的水溶性海星皂苷單體，為利用水溶性海星皂苷開發(fā)研制高效抗真菌藥物奠定基礎。1材料與方法材料與方法11材料羅氏海盤車(Asteriasrollestoni)采自青島膠州灣海域，裂殖酵母菌(Schizosacomycespombe)和白色念珠菌(Cidaalbicans)由中國海洋大學微生物工程實驗室友情惠贈，采用YPD培養(yǎng)基(酵母浸膏O5％

6、，蛋白胨1％，葡萄糖2％，瓊脂2％)于28cc培養(yǎng)；旋轉蒸發(fā)儀購自上海亞榮生化儀器廠，冷凍干燥機購自美國西盟(SIM)公司，AB一8型大孔樹脂購自天津南開化工廠，硅膠板及層析用硅膠(200～300目)購自青島海洋化工廠，Agilentl100型高壓液相柱層析(HPLC)儀、RID檢測器和AgilentZBAXEclipseXI)BC18型一斑點，合并收集為SC4純化樣品。對四種純化樣品分別進行旋轉蒸發(fā)和冷凍干燥后，冷凍保存?zhèn)溆谩裂殖酵

7、母菌；B白色酵母菌a30％乙醇溶液洗分_b50％乙醇溶液洗脫組分；c70％乙醇溶液洗脫組分；d。80％乙醇溶液洗脫組分；e95％乙醇溶液洗脫組分；各洗脫組分的使用質量濃度均為05m∥mL表l各種大孔樹脂柱洗脫組分對裂殖酵母菌和白色念珠菌的抑菌環(huán)大小(n=3，is)23硅膠柱層析純化樣品的抗真菌活性鑒定質量濃度為O5Ⅱl∥TlL的SF1、SF2、SF3和SF4純化樣品對裂殖酵母菌和白色念珠菌的抑菌環(huán)大小如圖3所示，抑菌環(huán)大小測定及其MIC