重組減毒細(xì)菌運(yùn)送cd839;t細(xì)胞表位的機(jī)理及攜帶新城疫病毒dna疫苗鼠傷寒沙門(mén)氏菌的免疫生物學(xué)特性研究

1、揚(yáng)州大學(xué)博士學(xué)位論文重組減毒細(xì)菌運(yùn)送CD8T細(xì)胞表位的機(jī)理及攜帶新城疫病毒DNA疫苗鼠傷寒沙門(mén)氏菌的免疫生物學(xué)特性研究姓名：潘志明申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：焦新安;Claude Leclerc20040501基因在細(xì)胞中獲得了表達(dá)?？乖岢式Y(jié)果顯示，O V A 2 5 7 —2 6 4 和L C M V l l 8 ．1 3 2C D 8 + T 細(xì)胞表位基因在抗原提呈細(xì)胞( A P C ) 中表達(dá)后，可被A P C

2、直接加工、提呈給特異性T 細(xì)胞雜交瘤B 3 Z 和n V l H 7 ，并刺激T 細(xì)胞雜交瘤分泌產(chǎn)生了I L 一2 。而且，隨著外源基因表達(dá)量的增多，其后所獲得的抗原提呈效應(yīng)也相應(yīng)增強(qiáng)。此結(jié)果說(shuō)明，重組質(zhì)粒p G 2 F 、p D G 2 F 和p G I B 構(gòu)建正確，即抗原表位基因無(wú)論是連接在G F P 基因的N 末端還是c 末端，都能獲得成功表達(dá)。感染試驗(yàn)證實(shí)，減毒大腸桿菌1 3 A 和2 5 A 以及減毒沙門(mén)氏菌S L 7 2

3、0 7 對(duì)L K 6細(xì)胞或L L d 細(xì)胞均具有良好的侵襲能力；而且骨髓源樹(shù)突狀細(xì)胞( B M D C ) 對(duì)重組大腸桿菌具有很好的攝取功能。三種細(xì)菌載體均能向L K 6 或L L d 細(xì)胞運(yùn)送真核表達(dá)質(zhì)粒p G 2 F ，并且外源G F P 基因獲得表達(dá)，但是對(duì)于不同的細(xì)胞類(lèi)型，細(xì)菌的運(yùn)送效率存在差異。L K 6 和L L d 細(xì)胞對(duì)原核表達(dá)的C D 8 + T 細(xì)胞表位的抗原提呈結(jié)果顯示，L K 6 細(xì)胞經(jīng)重組大腸桿菌1 3 A (

4、 p t G 2 F ) 和重組沙門(mén)氏菌S L 7 2 0 7 ( p t G 2 F ) 、S L 7 2 0 7 ( p D G 2 F )感染作用，在感染早期( 2 h ) ，L K 6 細(xì)胞可提呈1 3 A 和S L 7 2 0 7 表達(dá)的O V A 2 5 7 ．2 6 4C D 8 + T 細(xì)胞表位，在感染晚期( 4 8 h ) ，這一提呈效應(yīng)降低；L L d 經(jīng)重組大腸桿菌1 3 A ( p t G 2 F ) 感染，在感

5、染早期( 2 h ) ，L L o 細(xì)胞能提呈1 3 A 表達(dá)的L C M V l l 8 - 1 3 2C D 8 + T 細(xì)胞表位，且隨著感染時(shí)間的推移，提呈效應(yīng)隨之增強(qiáng)。鑒于2 5 A ( p t G 2 F )感染的L K b 和L L d 細(xì)胞均未能有效地刺激相應(yīng)的T 細(xì)胞雜交瘤，說(shuō)明2 5 A 沒(méi)有成功地運(yùn)送兩個(gè)T 細(xì)胞表位。在L K 6 和L L d 細(xì)胞對(duì)細(xì)菌運(yùn)送的真核表達(dá)質(zhì)粒的抗原提呈試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，重組大腸桿菌1 3 A

6、 ( p G 2 F ) 和2 5 A ( p G 2 F ) 感染L K 6 細(xì)胞2 h ，L K b 細(xì)胞就可將其表達(dá)的O V A C D 8 + T 細(xì)胞表位提呈給B 3 ZT 細(xì)胞雜交瘤，在感染4 8 h 時(shí)，提呈效應(yīng)獲得溫和的增強(qiáng)；經(jīng)重組沙門(mén)氏菌S L 7 2 0 7 ( p G 2 F ) 處理的L K 6 細(xì)胞，在早期( 2 h )缺乏刺激相應(yīng)T 細(xì)胞雜交瘤的能力，但在晚期( 4 8 h ) 則表現(xiàn)出提呈O V A C D

7、 8 + T細(xì)胞表位的活性。這說(shuō)明，1 3 A 和2 5 A 所攜帶的h l y 基因有助于真核表達(dá)質(zhì)粒在細(xì)胞中的釋放和表達(dá)。B M D C 對(duì)減毒大腸桿菌運(yùn)送的T 細(xì)胞表位的抗原提呈結(jié)果表明，B M D C 經(jīng)1 3 A ( p t G 2 F ) 和1 3 A ( p G 2 F ) 作用后，均能有效提呈O V A 2 5 7 - 2 6 4 和L C M V 1 1 8 - 1 3 2C D 8 + T 細(xì)胞表位給相應(yīng)的T 細(xì)胞雜