攜帶KGF基因的減毒沙門氏菌(SPK)的構(gòu)建及其治療作用.pdf

1、角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子(keratinocyte growth factor，KGF)可調(diào)節(jié)多種上皮細(xì)胞的增殖、遷移和分化過(guò)程，目前已用于治療多種疾病。但是，KGF蛋白在體內(nèi)的半衰期較短，而大劑量多次給藥又會(huì)引起嚴(yán)重的不良反應(yīng)，加之KGF重組蛋白價(jià)格昂貴，限制了其臨床應(yīng)用。因此，本研究擬采用減毒沙門氏菌作為載體，觀察KGF基因藥物對(duì)于疾病的治療效果。
　　 通過(guò)基因工程方法，將KGF基因連接至真核表達(dá)載體，經(jīng)電轉(zhuǎn)化方法將其導(dǎo)入減毒沙門

2、氏菌中，并鑒定出了攜帶KGF基因的陽(yáng)性菌株，命名為Salmonella-plasmid-KGF菌株，簡(jiǎn)稱為SPK菌株，然后觀察了SPK對(duì)三種常見難治性疾病的治療效果。
　　 輻射復(fù)合皮膚損傷是一種難愈合的創(chuàng)面，傷口愈合緩慢，而且易出現(xiàn)感染、水腫等并發(fā)癥，目前仍無(wú)有效的治療方法。首先用SPK菌株轉(zhuǎn)染人角質(zhì)形成細(xì)胞系HaCaT細(xì)胞，證明KGF基因可在細(xì)胞內(nèi)高效表達(dá)，并促進(jìn)細(xì)胞增殖。在大鼠輻射復(fù)合皮膚損傷模型中，局部傷口周圍注射SPK

3、菌株可抑制炎癥反應(yīng)，促進(jìn)血管新生和肉芽組織的形成，提高皮膚傷口愈合速率。
　　 放射治療可引起輻射性肺炎、肺纖維化等嚴(yán)重的副作用，極大地影響病人的生活質(zhì)量，干擾腫瘤治療效果。通過(guò)氣管滴注SPK菌株，可顯著降低X射線引起的大鼠肺組織損傷，抑制炎癥反應(yīng)，降低肺灌洗液中的總細(xì)胞數(shù)；使得肺組織中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活性升高，同時(shí)丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量下降，抵御了

4、氧自由基(reactive oxygen species，ROS)積累造成的損傷；此外，給予SPK還可調(diào)節(jié)某些細(xì)胞因子的表達(dá)水平，維持肺臟正常的生理功能。
　　 潰瘍性結(jié)腸炎是一種病因不明、復(fù)發(fā)率高、難治愈的炎癥性腸病，目前尚缺乏有效的治療藥物。在乙酸誘導(dǎo)的大鼠潰瘍性結(jié)腸炎中，口服SPK菌株，可明顯緩解結(jié)腸炎癥狀；抑制腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)的過(guò)量表達(dá)，降低炎癥反應(yīng)；降低RO