胃癌患者外周血及腫瘤組織中Treg細胞及亞群的研究.pdf

1、目的：胃癌（Gastric cancer, GC）是世界上腫瘤相關性死亡的主要原因之一，而調(diào)節(jié)性T細胞（Treg cells）被認為是抑制抗腫瘤免疫促進腫瘤免疫耐受的主要因素之一。以往有關Treg細胞與胃癌的研究結(jié)果存在爭議，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)Treg細胞是一類具有異質(zhì)性的T細胞亞群,存在表型和功能的不同，這可能是導致之前結(jié)果不一致的原因。而目前鮮有關于這類Treg亞群細胞與胃癌的研究報道，因此本次研究通過檢測胃癌患者外周血以及腫瘤組織中Treg

2、細胞及亞群的表達，探索Treg細胞及亞群與胃癌患者各臨床參數(shù)的相關性。
　　方法：搜集胃癌患者和健康對照組外周血、同一患者的胃癌組織和癌旁正常組織，制備、分離、提純單個核細胞，標記表面抗體CD3、CD4、CD45RA、CD25和核內(nèi)抗體Foxp3。再根據(jù)CD45RA和Foxp3的表達將Treg細胞分為CD45RA+Foxp3lo（rTreg），CD45RA-Foxp3hi（aTreg）和 CD45RA-Foxp3lo（non-Tr

3、eg）三種亞群。流式細胞儀檢測分析各個組Treg及亞群細胞占CD4+細胞的比例。Graph Pad Prism統(tǒng)計軟件（5.0版本）統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)，Kruskal-wallis檢驗（多組）、Mann-Whitney U檢驗（兩組）比較各組間的差異是否具有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果：胃癌患者外周血（GC-PBMC）及腫瘤浸潤淋巴細胞（TIL）中總的CD4+CD25+Foxp3+Treg細胞占CD4+T細胞比例要比健康對照組（HD-PBMC

4、）和癌旁正常組織浸潤淋巴細胞（NIL）的明顯增加（P＜0.0001，P＜0.0001），其差異有統(tǒng)計學意義。在外周血中胃癌患者的aTreg和non-Treg細胞比例較健康對照組明顯增加（P＜0.0001,P＜0.0001），差異有統(tǒng)計學意義。在組織浸潤淋巴細胞中，TIL-aTreg和TIL-non-Treg細胞比例較NIL明顯增加（P＜0.0001,P＜0.001）。分析 Treg細胞及其亞群與各臨床病理參數(shù)關系發(fā)現(xiàn)，僅發(fā)現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移（淋

5、巴轉(zhuǎn)移和遠處轉(zhuǎn)移）與Treg及亞群細胞相關，而與腫瘤位置、大小、分化程度、分期以及血清CEA濃度無明顯相關性。出現(xiàn)轉(zhuǎn)移者無論在PBMC還是TIL中總的CD4+CD25+Foxp3+Treg細胞所占比例均較無轉(zhuǎn)移者明顯增加（P＜0.05，P＜0.01），亞群細胞中只有轉(zhuǎn)移患者 TIL中的aTreg細胞所占比例較無轉(zhuǎn)移者明顯增加（P＜0.01）。
　　結(jié)論：我們的研究證實了在胃癌患者外周血和TIL中Treg細胞所占比例明顯增加，以aT

6、reg細胞增加最為明顯。而且只有TIL中增加的aTreg細胞與腫瘤轉(zhuǎn)移有關，提示在腫瘤微環(huán)境中起主要抑制抗腫瘤免疫的是TIL中的aTreg細胞，促使疾病的進展。所以在今后的免疫靶向治療中，局部地選擇性消除這類亞群細胞而非消除其他亞群細胞和（或）全身性的消除整個Treg細胞將有望成為一項有效治療胃癌的手段。同時我們還發(fā)現(xiàn)胃癌患者外周血及TIL中的non-Treg細胞也是增加的，但與疾病無明顯關聯(lián)，所以在以后的研究中，我們需要鑒別不同的Tr