RASSF10基因啟動子區(qū)甲基化可能是多西他賽耐藥的標記并通過抑制P53信號通路而抑制肝癌的生長.pdf

1、背景:肝癌是全球范圍內最常見的惡性腫瘤之一，在男性中發(fā)病排第五位，在女性中排第九位，死亡率在全球癌癥相關死亡率排第二位。肝癌的發(fā)病機制目前尚不明確。異常的遺傳學和表觀遺傳學累積性改變被認為是許多腫瘤的重要發(fā)病機制。在肝癌中已經發(fā)現(xiàn)了許多異常的表觀遺傳學的變化。RAS家族蛋白是與GTP綁定的有著相同結構域的蛋白，參與細胞的功能，如生長、粘附、遷移、分化和凋亡等。RAS家族有10個成員，按照其N末端和C末端結構分為兩組。C末端的RAS家族成

2、員在C端有RAS和SARAH結構域(RASSF1-6)，N末端RAS家族成員只有RAS結構域，而沒有SARAH結構域(RASSF7-10)。RASSF10位于人類染色體11p15.2，許多腫瘤在這一區(qū)域發(fā)生了雜合性缺失。RASSF10在許多人類腫瘤中發(fā)生了甲基化。以前的研究發(fā)現(xiàn)RASSF10通過激活P53信號通路抑制結腸癌的生長。本研究將探索RASSF10在肝癌發(fā)生、發(fā)展中的表觀遺傳學改變及作用。
　　目的:檢測RASSF10在肝

3、癌中的甲基化情況，探討RASSF10對肝癌細胞生長、凋亡等功能的影響及作用機制。并分析RASSF10甲基化與肝癌的診斷和預后的關系。
　　材料與方法:本研究應用10個肝癌細胞系(SNU182，SNU387，HBXF344，SNU475，HepG2，BEL7402，LM3，Huh7，PLC/PRF5和QGY7703)、69例原發(fā)性肝癌組織、31對原發(fā)性肝癌及配對的癌旁組織。應用半定量RT-PCR、甲基化特異性PCR(MSP)、亞硫酸

4、鹽測序(BSSQ)、免疫組化(IHC)、MTT實驗、克隆形成實驗、流式細胞儀檢測技術和蛋白免疫印跡雜交等技術分析RASSF10在肝癌細胞中的功能。
　　結果:RASSF10啟動子區(qū)在SNU387，HBXF344，HepG2，PLC/PRF/5，Huh7，BEL7402，LM3和QGY7703細胞系中發(fā)生甲基化并且表達缺失，在SNU182和SNU475細胞中啟動子區(qū)呈半甲基化狀態(tài)，且呈低豐度表達。5-aza處理后RASSF10不表達

5、或低表達的細胞株恢復表達，表明RASSF10的表達受到啟動子區(qū)甲基化的調控。RASSF10在原發(fā)性肝癌組織的甲基化率為82.6％(57/69)，在正常肝組織不發(fā)生甲基化。RASSF10的甲基化與肝癌患者的腫瘤大小和TNM分級相關(P＜0.05)。在HepG2和QGY7703細胞恢復RASSF10的表達可以抑制細胞的增殖，促進凋亡，誘導G2/M期細胞的阻滯。并可激活P53信號通路的活性，增加癌細胞對多西他賽的敏感性。
　　結論:RA