甲病毒M1誘導(dǎo)惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖抑制及凋亡的機(jī)制研究.pdf

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文甲病毒M1誘導(dǎo)惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖抑制及凋亡的機(jī)制研究姓名：蔡小峰申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：藥理學(xué)指導(dǎo)教師：顏光美20090520中山人學(xué)博l：學(xué)位論文甲病毒M1誘導(dǎo)惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖抑制及凋亡的機(jī)制研究和westernblot發(fā)現(xiàn)在M1誘導(dǎo)C6的凋亡模型中，伴隨有抗凋亡蛋白Bcl一2的轉(zhuǎn)錄后水平的下調(diào)；激光掃描共聚焦顯微鏡和(或)細(xì)胞分級(jí)分離證實(shí)促凋亡蛋白Bax線粒體轉(zhuǎn)位、線粒體膜電位降低、細(xì)胞色素C釋放及caspas

2、e一3的活化；進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)Bax通道阻斷劑能明硅地保護(hù)M1誘導(dǎo)的C6凋亡，并且能顯著地抑制細(xì)胞色素C的釋放和caspase一3的活化，提示了Bax的線粒體轉(zhuǎn)位和細(xì)胞色素C釋放介導(dǎo)了M1誘導(dǎo)的C6凋亡：同時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)caspase抑制劑Q—VD—OPh和蛋白酶體抑制荊MGl32等能不同程度地保護(hù)Ml所致的C6凋亡，并證實(shí)QVDOPh抑制了caspase3的激活，MGl32阻斷了Bcl一2的蛋白下調(diào)，提示caspase一3的激活以及Bcl

3、2的轉(zhuǎn)錄后下調(diào)介導(dǎo)了Ml所致的C6凋亡。此外，研究發(fā)現(xiàn)M1對(duì)人惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞T98G僅表現(xiàn)為增殖抑制效應(yīng)，并不引起凋亡或壞死；進(jìn)～步流式細(xì)胞儀分析T98G細(xì)胞周期阻滯在S期，主要表現(xiàn)為S期細(xì)胞比例增加，G2／M期細(xì)胞比例降低；另外通過激光掃描共聚焦顯微鏡證實(shí)在M1誘導(dǎo)的凋亡C6細(xì)胞中，細(xì)胞周期依賴性激酶一7(CDK7)從胞核轉(zhuǎn)位至胞漿，與原復(fù)合體成員周期素H(cyclinH)分離，這為后續(xù)深入探討增殖抑制的機(jī)制提供重要線索。最后，我們?cè)?/p>

4、多種腫瘤細(xì)胞(人惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251和U87，人肝癌細(xì)胞Hep3B，人前列腺癌細(xì)胞LNCaP和人膀胱癌細(xì)胞T24)和部分正常細(xì)胞(原代膠質(zhì)細(xì)胞和張氏肝細(xì)胞)的研究中首次初步證實(shí)M1能有效殺死這些腫瘤細(xì)胞，但對(duì)正常細(xì)胞沒有影響，提示M1有一定的腫瘤殺傷譜特性及一定的腫瘤特異性。這為M1抗腫瘤的在體研究提供有力的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和藥理學(xué)基礎(chǔ)，并為新病毒載體的開發(fā)及以甲病毒載體為基礎(chǔ)的腫瘤基因治療提供新的思路。第一章甲病毒M1誘導(dǎo)大鼠惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞