Rce1在腎細胞癌中的表達及其通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對腎癌細胞786-O凋亡的調(diào)節(jié).pdf

1、目的：
　　Rce1(Ras and a-factor-converting enzyme1)是一種位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（Endoplasmic Reticulum，ER）膜上的駐留蛋白酶，負責(zé)絕大多數(shù)CAAX類蛋白的加工。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（Endoplasmic Reticulum Stress，ERS）在腎細胞癌（Renal Cell Carcinoma,RCC）發(fā)展過程中起重要作用；然而在腎細胞癌中，Rce1的表達，及其與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激作用機制

2、間的關(guān)系尚未得到深入研究。本實驗旨在探討Rce1在腎細胞癌中的表達及其通過ERS誘導(dǎo)腎癌細胞786-O凋亡的分子機制。
　　方法：
　　采用實時熒光定量PCR（qRT-PCR）、蛋白質(zhì)免疫印記雜交（western blot）及免疫組化技術(shù)（Immunohistochemical）檢測腎細胞癌組織及相應(yīng)癌旁組織中Rce1表達情況。采用qRT-PCR和western blot技術(shù)檢測人胚腎細胞株HEK293及腎癌細胞株786-O

3、、ACHN、A498中Rce1表達差異情況。shRNA慢病毒干擾載體感染786-O細胞，敲降Rce1表達水平，應(yīng)用流式細胞術(shù)（FCM）及CCK-8檢測786-O細胞凋亡和增值改變情況。采用western blot技術(shù)檢測Rce1敲降前后，786-O細胞凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白的變化情況。
　　結(jié)果：
　　Rce1的表達水平，相較于腎細胞癌旁組織，在腎細胞癌組織中明顯上調(diào)，其陽性表達水平與患者臨床病理

4、特征密切相關(guān)。Rce1在人腎癌細胞株中表達上調(diào)，尤其是786-O細胞。慢病毒敲降786-O細胞中Rce1表達后，細胞凋亡增加，抑制被增殖（P＜0.05）。此外，敲降Rce1后，促凋亡蛋白Bax的表達上調(diào)，抗凋亡蛋白Bcl-2的表達下調(diào)。進一步研究表明，Rce1的下調(diào)也影響內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激因子的表達。
　　結(jié)論：
　　Rce1在腎細胞癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。Rce1低表達可以通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激使腎癌細胞的凋亡增加并抑制腎癌細胞增殖。