Mcl-1在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的胃腺癌細胞凋亡中的作用及其調(diào)控.pdf

1、背景及目的:胃腺癌是我國常見的惡性腫瘤,然而對其治療一直未令人滿意,這和胃腺癌細胞對誘導(dǎo)凋亡的相對耐受有著密切關(guān)系。目前除了傳統(tǒng)的外源性和線粒體細胞凋亡途徑之外,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)在細胞凋亡中發(fā)揮的作用也越來越受到關(guān)注。由于血供不足,營養(yǎng)條件差以及藥物影響等因素,腫瘤細胞內(nèi)存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的發(fā)生。應(yīng)激本身是細胞自我保護的行為,但是如果應(yīng)激時間過長或強度過大,應(yīng)激信號可以激活多種凋亡靶基因,引發(fā)細胞凋亡。研究表明,Bcl-2家族蛋白成員參與調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)

2、激誘導(dǎo)的細胞凋亡。Mcl-1是Bcl-2家族中一個重要的抗凋亡家族成員,參與線粒體細胞凋亡途徑,同時在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中也發(fā)揮至關(guān)重要的作用。Mcl-1基因的表達可以在多個水平受到調(diào)控,已知重要的轉(zhuǎn)錄因子E2F-1可以轉(zhuǎn)錄調(diào)控Mcl-1的表達。本實驗就以胃腺癌細胞為研究對象,用衣霉素誘導(dǎo)細胞,構(gòu)建內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的模型,旨在研究Bcl-2家族蛋白成員,特別是Mcl-1在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的胃腺癌細胞凋亡中的作用以及調(diào)控Mcl-1的機理,以期為臨床藥物干

3、預(yù)提供新的靶點。
　　方法:采用不同濃度的衣霉素(TM)在不同時間點處理體外培養(yǎng)的SGC-7901、BGC-823胃腺癌細胞和HEK-293人胚腎上皮細胞。通過PI染色法流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率。通過Western blot檢測caspase-9,-3的活化以及GRP78、Mcl-1、Bcl-2、E2F-1的蛋白變化。通過JC-1染色法流式細胞術(shù)檢測線粒體膜電位(Δψm)的變化。通過qRT-PCR法檢測Mcl-1 mRNA水平的變

4、化。轉(zhuǎn)染pcDNA-Flag-E2F-1質(zhì)粒,Western blot檢測E2F-1的表達情況和轉(zhuǎn)染前后Mcl-1蛋白水平的變化,流式細胞術(shù)檢測凋亡率的變化。
　　結(jié)果:衣霉素誘導(dǎo)胃腺癌細胞凋亡具有時間和劑量相關(guān)性,相對照HEK-293細胞,兩株胃腺癌細胞對衣霉素誘導(dǎo)的凋亡都不敏感,其中SGC-7901較BGC-823細胞對衣霉素誘導(dǎo)的凋亡表現(xiàn)更加耐受,這可能與Mcl-1在蛋白水平和mRNA水平的上調(diào)有關(guān)。同時,衣霉素處理并不誘導(dǎo)

5、Bcl-2在胃腺癌細胞中的表達變化。轉(zhuǎn)錄因子E2F-1在衣霉素誘導(dǎo)后是下調(diào)的。在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀態(tài)下的胃腺癌細胞中高表達E2F-1可以減弱Mcl-1的上調(diào),細胞凋亡率明顯上升。并且隨著轉(zhuǎn)染質(zhì)粒濃度的增加,Mcl-1表達下降更加明顯。
　　結(jié)論:胃腺癌細胞對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的凋亡相對耐受,與Mcl-1在蛋白表達水平和mRNA轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)有關(guān),表明Mcl-1在胃腺癌細胞對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激性凋亡的耐受中起到一定的作用,而轉(zhuǎn)錄因子E2F-1參與了對M