p62-SQSTM1調(diào)控TBK1磷酸化參與RNA病毒誘導天然免疫應答機制的研究.pdf

1、p62/SQSTM1是參與細胞代謝和應激反應的重要信號傳導中心，作為“腳手架”蛋白，p62通過與不同信號分子相互作用，調(diào)控細胞自噬、氧化應激和天然免疫。天然免疫是宿主防御外來入侵病原體的第一道防線，宿主通過胚系基因編碼的模式識別受體識別病原相關(guān)分子模式進而激活下游信號通路，產(chǎn)生多種細胞因子抵抗病原體侵襲。針對RNA病毒，宿主主要利用膜結(jié)合的Toll樣受體和胞質(zhì)中的RIG-Ⅰ樣受體識別病毒核酸。在RIG-Ⅰ樣受體介導的細胞Ⅰ型干擾素免疫應

2、答中，TBK1作為激酶直接催化重要調(diào)控因子IRF3磷酸化，誘導Ⅰ型干擾素IFN-β產(chǎn)生發(fā)揮抗病毒作用。同時TBK1還催化NF-κB相關(guān)蛋白磷酸化，激活轉(zhuǎn)錄因子NF-κB，是聯(lián)系Ⅰ型干擾素信號通路和NF-κB信號通路的關(guān)鍵激酶。以往研究發(fā)現(xiàn)p62通過與TRAF6等分子相互作用調(diào)控NF-κB的激活，而TRAF6還參與細胞Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生。在病毒誘導的天然免疫應答中，關(guān)鍵接頭分子MAVS被模式識別受體活化后招募TRAF6，利用TRAF6促進I

3、KKγ的泛素化使之活化進而招募TBK1等分子，激活Ⅰ型干擾素表達。鑒于p62可調(diào)控TRAF6的活性影響NF-κB活化以及TBK1作為關(guān)鍵激酶聯(lián)系著NF-κB信號通路和Ⅰ型干擾素信號通路，p62可能也參與宿主Ⅰ型干擾素免疫應答，然而p62是否影響病毒感染誘導的Ⅰ型干擾素產(chǎn)生目前尚不清楚。本研究旨在明確p62對RNA病毒誘導IFN-β產(chǎn)生的影響及其作用機制。發(fā)現(xiàn)敲減p62可導致RNA病毒感染誘導的細胞IRF3二聚化減弱、ISRE報告質(zhì)粒表達

4、水平和IFN-βmRNA水平下調(diào)，表明干擾p62的表達可影響宿主細胞Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生并且通過進一步實驗發(fā)現(xiàn)p62作用于IRF3上游。通過免疫共沉淀發(fā)現(xiàn)p62與TBK1相互作用，而且敲減p62可抑制IRF3的磷酸化。利用體外激酶實驗并檢測TBK1磷酸化水平，發(fā)現(xiàn)敲減p62可導致TBK1Ser172位磷酸化水平下調(diào)抑制TBK1激酶活性從而抑制TBK1催化IRF3磷酸化。通過體外磷酸酶實驗發(fā)現(xiàn)細胞敲減p62導致的TBK1Ser172磷酸化減弱

5、是由磷酸酶PP2A活性增強催化TBK1去磷酸化引起的。此外還發(fā)現(xiàn)敲減p62可促進仙臺病毒SeV、水皰性口炎病毒VSV和呼吸道合胞病毒RSV的復制。
　　綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)在RNA病毒感染誘導的天然免疫應答中p62通過抑制磷酸酶PP2A對TBK1去磷酸化調(diào)控TBK1激酶活性的分子機制，為自噬與天然免疫相互調(diào)控提供了新的機制，進一步豐富了對細胞自噬與天然免疫相互聯(lián)系相互調(diào)控共同發(fā)揮抗病毒作用的認識，為尋找潛在抗病毒藥物靶點提供了新方