重組人FGF18對非小細胞肺癌H460細胞增殖、遷移作用及其機制研究.pdf

1、前言：近年來，盡管在癌癥的診斷和治療方面的技術有所改進，但是肺癌仍然是全世界癌癥相關死亡的主要原因之一，且長期存活率較低。非小細胞肺癌(Non-small cell lung cancer, NSCLC)約占肺癌總數(shù)的85％，由于其高侵襲性、易遷移、復發(fā)率高，大多數(shù)NSCLC對化學治療和放射治療不敏感。因此進一步了解和探索NSCLC侵襲、轉移和生長的分子機制顯得尤為重要。很多體內和體外實驗都已驗證了FGFs家族成員在肺癌發(fā)生過程中起到關

2、鍵作用，且越來越多的研究表明，F(xiàn)GF/FGFR信號通路可激活多條下游信號通路如絲裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinases,MAPK）,磷脂酰肌醇3-激酶（Phosphoinositide3-kinase,PI3K）,蛋白激酶C(Protein kinase C, PKC)等參與肺癌的多項進程，如促進肺癌細胞的增殖、侵襲、凋亡等。有報道稱成纖維細胞生長因子18(Fibroblast growth

3、 factor18, FGF18)在直腸癌和乳腺癌中表達升高，且FGF18蛋白以及基因表達的增加與腫瘤進程以及患者總生存較差相關。不過目前關于 FGF18在肺癌中的作用仍未有報道。
　　目的：1.觀察FGF18對人非小細胞肺癌細胞H460的增殖促進作用和細胞周期變化。
　　2.研究FGF18對H460細胞的遷移促進作用以及遷移相關蛋白MMP26表達水平的影響，從而揭示FGF18促進H460細胞遷移的部分機制。
　　3.

4、研究ERK、p38信號分子在FGF18促進H460細胞增殖、遷移過程中的作用。4.探討FGF18-siRNA對H460細胞的增殖、遷移作用，以確定FGF18作為肺癌靶向治療的潛在靶點。
　　方法：1.采用MTT法觀察FGF18分別以不同濃度（0、5、10、50、100、200 ng/ml）、不同時間（0、24、48、72 h）作用后在人非小細胞肺癌細胞H460的增殖作用；采用流式細胞術分析不同濃度（0、5、10、50 ng/ml）

5、FGF18對H460細胞周期的影響。
　　2.應用劃痕實驗觀察FGF18對H460細胞的遷移作用；應用Western Blot和RT-qPCR檢測FGF18對遷移相關蛋白MMP26基因以及蛋白水平的影響。
　　3.FGF18作用于H460細胞，采用Western Blot檢測細胞總蛋白ERK、p-ERK、p38、p-p38表達變化；特異性ERK抑制劑FR180204、p38抑制劑SB203580預處理FGF18刺激的H460

6、細胞：MTT法檢測細胞增殖的變化，劃痕實驗檢測細胞遷移的變化，應用Western Blot檢測細胞總蛋白MMP26表達變化。
　　4.將FGF18-siRNA轉染入H460細胞，應用Western Blot和RT-qPCR檢測FGF18抑制效率；檢測H460細胞內增殖、遷移及蛋白的變化。
　　結果：1.MTT法檢測得出FGF18促進了H46O細胞的增殖，并表現(xiàn)出時間梯度以及濃度梯度的依賴性，其中低濃度組（5、10、50 ng

7、/ml）與高濃度組（100、200 ng/ml）相比，前者作用濃度更佳。故流式細胞術分析了低濃度的FGF18對H460的作用。結果顯示FGF18增加了H460細胞周期中的G0/G1期比例，降低了S期跟G2/ M期的比例，表明可能是通過調控細胞周期從而促進了細胞增殖。2.劃痕實驗顯示FGF18（0、5、10、50 ng/ml）促進了H460細胞的遷移，MMP26在 mRNA水平以及蛋白水平表達都有明顯提高，可能是通過增加遷移相關蛋白MMP

8、26的表達而影響了遷移作用。
　　3.與對照組相比，低濃度FGF18作用組的p-ERK/ERK和p-p38/p38同時上調,且隨著濃度的增加兩者的表達水平逐漸升高；分別使用ERK抑制劑(FR180204)和p38抑制劑SB203580后，均抑制了FGF18對H460細胞的促增殖、促遷移作用，但對MMP26蛋白的表達并無明顯作用。
　　4.轉染siRNA-FGF18后有效地抑制了FGF18的表達，mRNA以及蛋白水平驗證FGF

9、18表達的抑制率分別為20%和48.7%；與對照組相比，si-FGF18組細胞增殖、遷移能力均受抑制，除細胞周期無明顯變化外，MMP26、p-ERK和 p-p38表達水平均顯著降低。
　　結論：1.FGF18可通過影響細胞周期來促進人非小細胞肺癌細胞H460的增殖作用。
　　2.FGF18可通過增加MMP26的表達來促進人非小細胞肺癌細胞H460的遷移作用。
　　3.FGF18激活了人非小細胞肺癌細胞中ERK、p38信