MEHP對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖和遷移作用的機(jī)制探討.pdf

1、目的：
　　觀察大鼠神經(jīng)干細(xì)胞及小鼠神經(jīng)干細(xì)胞暴露于MEHP后，是否對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖及遷移產(chǎn)生影響。觀察MEHP對(duì)增殖相關(guān)基因(GR，Stat3，Sox2)及其蛋白的影響、遷移相關(guān)的基因(Stat3，Sox2)及其蛋白的影響，并探討其相關(guān)影響機(jī)制。
　　方法：
　　神經(jīng)干細(xì)胞的獲取和培養(yǎng):取孕15天(E15) SD大鼠，麻醉后取其大腦皮質(zhì)，分離出原代神經(jīng)干細(xì)胞接種到DMEM/F12的完全培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，穩(wěn)定傳代至第

2、二代進(jìn)行MEHP暴露處理。細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照組、DMSO組、MEHP1組、MEHP10組、MEHP100組，MEHP1000組，12 h后對(duì)照組不進(jìn)行處理，其他組各按照0.1％ DMSO、1μmol·L-1、10μ mol·L1、100μmol·L-1、1000μ mol·L-1處理細(xì)胞，暴露時(shí)間為72 h。MEHP對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞的毒性、活力及增殖作用檢測(cè):MEHP暴露大鼠神經(jīng)干細(xì)胞72 h后，CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞毒性;EdU增殖試劑盒檢測(cè)

3、神經(jīng)干細(xì)胞的增殖，Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MEHP對(duì)NE-4C細(xì)胞株的遷移能力的影響。剔除存在細(xì)胞毒性的MEHP1000μ M劑量組，其余組進(jìn)行神經(jīng)干細(xì)胞及NE-4C細(xì)胞株暴露，72 h后提取細(xì)胞RNA及蛋白，標(biāo)本凍存待用?；蚣暗鞍讬z測(cè):熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法(qRT-PCR)檢測(cè)神經(jīng)干細(xì)胞GR，Stat3和Sox2 mRNA表達(dá);Western blot法檢測(cè)神經(jīng)干細(xì)胞GR，GRβ，Stat3，p-Stat3及Sox2蛋白表達(dá)

4、。
　　結(jié)果：
　　MEHP作用72h后，CCK-8顯示NE-4C和NSC細(xì)胞活力在1000μmol·L-1分別為73.2％±2.0％（P＜0.05），68.5％±1.2％（P＜0.05)，和對(duì)照組相比，NE-4C和NSC細(xì)胞的活力分別減弱了70.3％和40％。EdU結(jié)果表明在100μmol·L-1時(shí)，NE-4C和NSC細(xì)胞的增殖率分別為80.1％±1.9％（P＜0.05），75.4％±2.4％（P＜0.05)，和對(duì)照組相比

5、，NE-4C和NSC的增殖能力分別被抑制了74.8％和12％（P＜0.05)。在Transwell實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)100μmol·L-1MEHP處理后，NE-4C細(xì)胞的遷移率為63.4％±2.0％(P＜0.05)。同時(shí)在NE-4C中與增殖及遷移相關(guān)的基因GR、stat3及sox2的表達(dá)下調(diào)，其表達(dá)分別為37％±23％（P＜0.05)，21％±15％（P＜0.05)，11％±5％（P＜0.05)，和對(duì)照組比，GR的表達(dá)減少了49.8％，Stat

6、3為26％，Sox2則為14％。在NSC中與增殖和遷移相關(guān)的基因GR、stat3及sox2的表達(dá)分別為61％±13％（P＜0.05)，11％±7％（P＜0.05)，9％±4％（P＜0.05)，和對(duì)照組比，GR，stat3及Sox2分別降低了10％，14％和15.3％。在NE-4C中與增殖及遷移相關(guān)的蛋白GR、GRβ、p-stat3及sox2的表達(dá)下調(diào)0.92±0.17(P＜0.05),0.87±0.35(P＜0.05),0.62±0.2

7、4(P＜0.05),0.81±0.22（P＜0.05），在NSC中與增殖和遷移相關(guān)的蛋白GR、stat3及sox2的表達(dá)分別為0.82±0.20(P＜0.05),0.56±0.12(P＜0.05),0.53±0.20(P＜0.05)0.84±0.36（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　大劑量MEHP抑制神經(jīng)干細(xì)胞增殖和遷移能力。MEHP抑制細(xì)胞增殖可能與其抑制GRβ有關(guān)，其機(jī)制可能與MEHP抑制GRβ蛋白水平的表達(dá)，同時(shí)引起