SOCS3在小鼠肝臟纖維化進展和逆轉過程中對巨噬細胞極化的影響.pdf

1、近些年，肝臟疾病的發(fā)病率在逐年增高，眾多損傷因素如酒精、病毒、化學物質等存在下，肝臟將發(fā)生不同程度的損傷，如病毒性肝炎、酒精肝、肝纖維化、肝硬化、肝癌等肝臟疾病的發(fā)生。而肝臟作為人體重要的代謝器官，其自身器官不同程度的損傷直接影響著機體其他疾病的發(fā)生發(fā)展。因此，研究肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展和尋找其治愈肝臟疾病的方法方式已刻不容緩。
　　Kupffer細胞（KCs）是存在于肝臟竇狀隙內的一類非實質細胞，屬于定居肝臟內的固有細胞，KCs即能

2、夠非特異的吞噬和清除血液中的細菌、外源性異物等抗原性物質，還具有特異性的免疫應答、抗腫瘤免疫反應、內毒素解毒、抗感染、調節(jié)微循環(huán)及物質代謝等方面的作用。在肝臟不同的病理生理狀態(tài)下，KCs能夠極化成不同的亞型，即M1(classically activated macrophages)型和M2（alternatively activated macrophages）型，M1型巨噬細胞主要能夠促進炎癥的發(fā)生發(fā)展，分泌產生TNF-α（tumo

3、r necrosis factor alpha)、IL-1(interleukin1)、IL-6（interleukin6）等促炎細胞因子；M2型巨噬細胞其主要功能是抑制炎癥的發(fā)生發(fā)展和對組織的修復產生作用，通過合成和分泌抗炎細胞因子 IL-10（interleukin10）以及通過Arg-1（arginase1）將精氨酸分解成聚胺，來參與合成和穩(wěn)定細胞外基質。巨噬細胞通過M1型和M2型的動態(tài)調控來影響肝臟的病理生理狀況，因此，通過上述

4、現(xiàn)象來調控肝臟巨細胞的極化從而來達到肝臟疾病的恢復這一研究思路將為肝臟疾病的治療尋找新的靶點和策略。
　　已有研究表明SOCS3（Suppressor of cytokine signaling3）參與肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展，通過影響多種細胞因子的產生和信號傳導進行負性調控，如通過免疫調控來影響炎癥因子和趨化因子進而去調控炎癥反應，而肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展有巨噬細胞的參與，巨噬細胞與炎癥的發(fā)生發(fā)展密切相關，設想是否SOCS3參與肝纖維化的

5、發(fā)生發(fā)展，此外，另有報道顯示，肝纖維化在去除損傷因素后能夠發(fā)生逆轉[1]，進而，通過調控SOCS3蛋白的表達去影響肝纖維化的逆轉過程和肝臟巨噬細胞極化分型過程從而探索其對肝纖維化的影響。且課題組前期研究發(fā)現(xiàn) SOCS3在動物肝纖維化和逆轉過程中存在著表達的變化，且在肝臟巨噬細胞中表達，但SOCS3在肝纖維化中的調控作用，尤其是對肝巨噬細胞極化分型相關作用尚未報道，于是本實驗室重點研究通過調控SOCS3的表達觀察對KCs極化分型的影響進而

6、為肝纖維化的防治提供新的思路。
　　主要研究內容概括如下：
　　1. SOCS3在小鼠肝臟纖維化進展和逆轉過程中的表達。
　　取肝臟組織，利用免疫熒光雙染和免疫組織化學的方法觀察SOCS3在肝臟組織的的表達情況。結果發(fā)現(xiàn)：SOCS3在小鼠肝臟巨噬細胞中表達，并且，隨著小鼠肝纖維化的形成，SOCS3的表達逐漸增多，隨著小鼠肝纖維化的逆轉的進行，SOCS3的表達逐漸減少。
　　2.小鼠肝纖維化進展和逆轉過程中肝臟巨噬

7、細胞表型的變化。
　　通過原位灌流技術提取不同時期小鼠肝臟巨噬細胞，利用流式細胞技術對提取的肝臟巨噬細胞進行分型研究。結果發(fā)現(xiàn)：隨著小鼠肝纖維化的形成，CD86標記的M1型巨噬細胞表達逐漸增多，隨著小鼠肝纖維化的逆轉,CD206標記的M2型巨噬細胞逐漸增多。
　　3. SOCS3在體外RAW264.7細胞中通過刺激因子作用在巨噬細胞分型中的表達。
　　體外通過RAW264.7細胞通過LPS和IFN-γ刺激形成M1型，I

8、L-4刺激形成M2型，觀察SOCS3在不同分型中的表達。結果發(fā)現(xiàn)：SOCS3相對于M2型，在M1型表達量顯著增高。
　　4.干擾SOCS3的表達對RAW264.7細胞極化分型的影響。
　　LipofectamineTM2000轉染SOCS3-siRNA到RAW264.7細胞內，可使LPS(Lipopolysaccharides)和IFN-γ(Interferonγ)刺激形成M1型表達顯著增多，LipofectamineTM2