SOCS3在小鼠肝臟纖維化進(jìn)展和逆轉(zhuǎn)過(guò)程中對(duì)巨噬細(xì)胞極化的影響.pdf

1、近些年，肝臟疾病的發(fā)病率在逐年增高，眾多損傷因素如酒精、病毒、化學(xué)物質(zhì)等存在下，肝臟將發(fā)生不同程度的損傷，如病毒性肝炎、酒精肝、肝纖維化、肝硬化、肝癌等肝臟疾病的發(fā)生。而肝臟作為人體重要的代謝器官，其自身器官不同程度的損傷直接影響著機(jī)體其他疾病的發(fā)生發(fā)展。因此，研究肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展和尋找其治愈肝臟疾病的方法方式已刻不容緩。
　　Kupffer細(xì)胞（KCs）是存在于肝臟竇狀隙內(nèi)的一類(lèi)非實(shí)質(zhì)細(xì)胞，屬于定居肝臟內(nèi)的固有細(xì)胞，KCs即能

2、夠非特異的吞噬和清除血液中的細(xì)菌、外源性異物等抗原性物質(zhì)，還具有特異性的免疫應(yīng)答、抗腫瘤免疫反應(yīng)、內(nèi)毒素解毒、抗感染、調(diào)節(jié)微循環(huán)及物質(zhì)代謝等方面的作用。在肝臟不同的病理生理狀態(tài)下，KCs能夠極化成不同的亞型，即M1(classically activated macrophages)型和M2（alternatively activated macrophages）型，M1型巨噬細(xì)胞主要能夠促進(jìn)炎癥的發(fā)生發(fā)展，分泌產(chǎn)生TNF-α（tumo

3、r necrosis factor alpha)、IL-1(interleukin1)、IL-6（interleukin6）等促炎細(xì)胞因子；M2型巨噬細(xì)胞其主要功能是抑制炎癥的發(fā)生發(fā)展和對(duì)組織的修復(fù)產(chǎn)生作用，通過(guò)合成和分泌抗炎細(xì)胞因子 IL-10（interleukin10）以及通過(guò)Arg-1（arginase1）將精氨酸分解成聚胺，來(lái)參與合成和穩(wěn)定細(xì)胞外基質(zhì)。巨噬細(xì)胞通過(guò)M1型和M2型的動(dòng)態(tài)調(diào)控來(lái)影響肝臟的病理生理狀況，因此，通過(guò)上述

4、現(xiàn)象來(lái)調(diào)控肝臟巨細(xì)胞的極化從而來(lái)達(dá)到肝臟疾病的恢復(fù)這一研究思路將為肝臟疾病的治療尋找新的靶點(diǎn)和策略。
　　已有研究表明SOCS3（Suppressor of cytokine signaling3）參與肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展，通過(guò)影響多種細(xì)胞因子的產(chǎn)生和信號(hào)傳導(dǎo)進(jìn)行負(fù)性調(diào)控，如通過(guò)免疫調(diào)控來(lái)影響炎癥因子和趨化因子進(jìn)而去調(diào)控炎癥反應(yīng)，而肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展有巨噬細(xì)胞的參與，巨噬細(xì)胞與炎癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，設(shè)想是否SOCS3參與肝纖維化的

5、發(fā)生發(fā)展，此外，另有報(bào)道顯示，肝纖維化在去除損傷因素后能夠發(fā)生逆轉(zhuǎn)[1]，進(jìn)而，通過(guò)調(diào)控SOCS3蛋白的表達(dá)去影響肝纖維化的逆轉(zhuǎn)過(guò)程和肝臟巨噬細(xì)胞極化分型過(guò)程從而探索其對(duì)肝纖維化的影響。且課題組前期研究發(fā)現(xiàn) SOCS3在動(dòng)物肝纖維化和逆轉(zhuǎn)過(guò)程中存在著表達(dá)的變化，且在肝臟巨噬細(xì)胞中表達(dá)，但SOCS3在肝纖維化中的調(diào)控作用，尤其是對(duì)肝巨噬細(xì)胞極化分型相關(guān)作用尚未報(bào)道，于是本實(shí)驗(yàn)室重點(diǎn)研究通過(guò)調(diào)控SOCS3的表達(dá)觀察對(duì)KCs極化分型的影響進(jìn)而

6、為肝纖維化的防治提供新的思路。
　　主要研究?jī)?nèi)容概括如下：
　　1. SOCS3在小鼠肝臟纖維化進(jìn)展和逆轉(zhuǎn)過(guò)程中的表達(dá)。
　　取肝臟組織，利用免疫熒光雙染和免疫組織化學(xué)的方法觀察SOCS3在肝臟組織的的表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：SOCS3在小鼠肝臟巨噬細(xì)胞中表達(dá)，并且，隨著小鼠肝纖維化的形成，SOCS3的表達(dá)逐漸增多，隨著小鼠肝纖維化的逆轉(zhuǎn)的進(jìn)行，SOCS3的表達(dá)逐漸減少。
　　2.小鼠肝纖維化進(jìn)展和逆轉(zhuǎn)過(guò)程中肝臟巨噬

7、細(xì)胞表型的變化。
　　通過(guò)原位灌流技術(shù)提取不同時(shí)期小鼠肝臟巨噬細(xì)胞，利用流式細(xì)胞技術(shù)對(duì)提取的肝臟巨噬細(xì)胞進(jìn)行分型研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：隨著小鼠肝纖維化的形成，CD86標(biāo)記的M1型巨噬細(xì)胞表達(dá)逐漸增多，隨著小鼠肝纖維化的逆轉(zhuǎn),CD206標(biāo)記的M2型巨噬細(xì)胞逐漸增多。
　　3. SOCS3在體外RAW264.7細(xì)胞中通過(guò)刺激因子作用在巨噬細(xì)胞分型中的表達(dá)。
　　體外通過(guò)RAW264.7細(xì)胞通過(guò)LPS和IFN-γ刺激形成M1型，I

8、L-4刺激形成M2型，觀察SOCS3在不同分型中的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：SOCS3相對(duì)于M2型，在M1型表達(dá)量顯著增高。
　　4.干擾SOCS3的表達(dá)對(duì)RAW264.7細(xì)胞極化分型的影響。
　　LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染SOCS3-siRNA到RAW264.7細(xì)胞內(nèi)，可使LPS(Lipopolysaccharides)和IFN-γ(Interferonγ)刺激形成M1型表達(dá)顯著增多，LipofectamineTM2