RPE細胞對T細胞的免疫調節(jié)功能在AMD中的作用及機制研究.pdf

1、背景及目的：年齡相關性黃斑變性（age-related macular degeneration，AMD）是由多種因素引起黃斑區(qū)視網(wǎng)膜色素上皮（retinal pigmented epithelium，RPE）細胞和感光細胞損傷為特征的疾病，其發(fā)病機理仍不清楚。近年來發(fā)現(xiàn)T細胞、巨噬細胞等免疫反應是AMD發(fā)病的重要因素。但在AMD發(fā)生時RPE細胞對T細胞的免疫功能并不清楚。因此，本課題旨在研究在 AMD危險因子作用下 RPE細胞對T細胞

2、亞群的免疫調節(jié)功能，從而探索T細胞免疫在AMD發(fā)生中的作用及機制。
　　方法：首先，通過分離小鼠原代RPE細胞或用人ARPE19細胞系與初始 T細胞共同培養(yǎng)，并在各 T細胞亞群分化環(huán)境中共培養(yǎng)，流式細胞術檢測誘導的T細胞亞群的表型與功能，研究正常RPE細胞對T細胞的免疫調節(jié)功能。其次，用AMD危險因子A2E刺激RPE細胞，在體外模擬AMD發(fā)生時RPE細胞的氧化損傷，并與T細胞共培養(yǎng)，通過流式細胞術和RT-PCR技術檢測T細胞亞群分

3、化狀況，研究AMD危險因子對RPE細胞調控T細胞功能的影響。最后，通過ELISA和RT-PCR檢測A2E刺激后RPE細胞的免疫狀態(tài)，并通過中和IL-1β或抑制COX2-PGE2通路分析介導A2E損傷RPE細胞對T細胞調節(jié)功能的因素和信號通路。
　　結果：首先，正常 RPE細胞能誘導 T細胞分化為具有免疫調節(jié)功能Foxp3+調節(jié)性T細胞，并能抑制初始T細胞分化為Th1、Th2、Th17等效應性T細胞亞群。其次，A2E抑制RPE細胞誘

4、導Foxp3+調節(jié)性T細胞的功能，并且A2E可特異性損傷RPE細胞對Th1細胞分化的免疫抑制功能，卻并不影響RPE細胞對Th2和Th17細胞的抑制功能。最后，我們發(fā)現(xiàn)A2E能刺激RPE細胞產生氧化應激損傷并產生IL-1β、IL-12b、IL-18等炎癥因子，使RPE細胞處于炎癥狀態(tài)。正常RPE細胞通過PGE2-COX2通路發(fā)揮對T細胞的免疫調節(jié)功能，而A2E可通過抑制PGE2-COX2通路，激活IL-1β，從而抑制RPE細胞對Th1細胞