砷劑治療非小細(xì)胞肺癌的機(jī)制研究及斑馬魚c-cbl基因環(huán)指結(jié)構(gòu)域突變的功能研究.pdf

1、肺癌是全球范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率最高的癌癥之一，其中約85%的患者為非小細(xì)胞肺癌（Non-small cell lung cancer,NSCLC），雖然分子靶向藥物尤其是針對(duì)表皮生長(zhǎng)因子受體（Epidermal Growth Factor Receptor，EGFR）的靶向藥物吉非替尼的誕生有效延長(zhǎng)了部分NSCLC患者的生存期，但耐藥現(xiàn)象經(jīng)常發(fā)生，且整體來看NSCLC患者的生存時(shí)間仍然較短，尋找新的NSCLC治療方案是一個(gè)亟待解決的問題

2、。砷劑作為一種傳統(tǒng)的中藥，在與全反式維甲酸聯(lián)用后對(duì)絕大部分急性早幼粒細(xì)胞性白血病患者起到治愈的作用，在慢性粒細(xì)胞性白血病的治療中也展示出了一定的效果，但砷劑對(duì)實(shí)體瘤的作用鮮有報(bào)道。本課題在細(xì)胞株、動(dòng)物模型和患者標(biāo)本三個(gè)層次上，探索了砷劑治療NSCLC的效果，應(yīng)用免疫熒光、透射電鏡、蛋白免疫印跡、免疫共沉淀等方法，研究了其治療的分子和細(xì)胞機(jī)制。結(jié)果表明，砷劑抑制NSCLC細(xì)胞株（尤其是對(duì)吉非替尼耐藥細(xì)胞株）的增殖，其主要作用是誘導(dǎo)NSCL

3、C細(xì)胞株的自噬（Autophagy）。砷劑可直接結(jié)合到自噬相關(guān)蛋白p62上，促進(jìn)p62與癌蛋白EGFR的相互作用，最終引起EGFR經(jīng)自噬-溶酶體途徑降解。在NSCLC小鼠模型，砷劑抑制裸鼠皮下腫瘤生長(zhǎng)，延長(zhǎng)NOD-SCID原位模型的生存期。在一組晚期NSCLC患者，胸腔局部應(yīng)用砷劑減少了胸水中肺癌細(xì)胞的數(shù)目。本研究結(jié)果提示：砷劑對(duì)NSCLC患者具有潛在治療價(jià)值，其應(yīng)用或與靶向治療藥物聯(lián)用有可能進(jìn)一步改善預(yù)后，提高患者的生活質(zhì)量，值得深入

4、研究。
　　在脊椎動(dòng)物正常的生長(zhǎng)發(fā)育中，造血干/祖細(xì)胞的自我更新能力和分化能力是受到嚴(yán)格調(diào)控的，調(diào)節(jié)過程牽涉到多種轉(zhuǎn)錄因子，信號(hào)分子和表觀遺傳學(xué)因子。任何的調(diào)控受損都可能會(huì)導(dǎo)致包括腫瘤在內(nèi)的血液系統(tǒng)疾病發(fā)生。使用大規(guī)模的斑馬魚N-乙基-N-亞硝基脲（ENU）誘變篩選，我們鑒定了一個(gè)名為L(zhǎng)DD731的斑馬魚家系，其造血器官呈現(xiàn)顯著的造血干祖細(xì)胞標(biāo)志物表達(dá)增加,而其他組織、器官和大體發(fā)育未見異常。進(jìn)一步的分析顯示，在定向造血中紅系/髓

5、系細(xì)胞數(shù)目均升高，而原始造血未受影響。為了尋找LDD731家系中的基因異常，我們采用了定位克隆的方法，將異常位點(diǎn)定位在15號(hào)染色體的c-cbl基因上，其在人類中的同源基因?yàn)閏-CBL，而已知c-CBL的突變常見于人類骨髓增生性腫瘤（myeloproliferative neoplasms,MPN）或急性白血病。測(cè)序分析表明，在LDD731家系的突變體中，其c-cbl基因的第1144位堿基由C變?yōu)門，導(dǎo)致其第382位的氨基酸殘基由組氨酸變