rLj-RGD3對(duì)卵巢癌HeyA8細(xì)胞活性影響及機(jī)制研究.pdf

1、卵巢癌是在卵巢組織發(fā)生的惡性腫瘤，臨床上通常因其癥狀不明顯而導(dǎo)致患者死亡率較高。目前，相關(guān)于卵巢癌的早期診斷和治療仍面臨許多不足，因此深入探討卵巢癌的發(fā)病機(jī)制以及篩選高效、副作用小的新型抗腫瘤藥物已成為當(dāng)今醫(yī)療研究領(lǐng)域中的重點(diǎn)。RGD(Arg-Gly-Asp)模體是一類含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸的短肽序列，能夠特異識(shí)別細(xì)胞表面部分的整合素。近年來，陸續(xù)有大量研究關(guān)注于RGD短肽在抗腫瘤等方面的應(yīng)用。盡管前期研究已經(jīng)報(bào)道了來自于七鰓鰻口

2、腔腺的重組多肽Lj-RGD3(recombinant Lj-RGD3，rLj-RGD3)不僅能夠抑制血小板聚集，還能夠誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞(ECV304)、乳腺癌細(xì)胞和肝癌細(xì)胞發(fā)生凋亡，但是相關(guān)于rLj-RGD3對(duì)卵巢癌HeyA8細(xì)胞的作用及機(jī)制還未有任何研究報(bào)道。
　　本研究首次分析了rLj-RGD3對(duì)卵巢癌HeyA8細(xì)胞增值的抑制作用，并詳細(xì)探討了其作用機(jī)制。MTT結(jié)果表明rLj-RGD3能夠以劑量依賴性的方式顯著抑制HeyA8細(xì)胞的

3、增值，其IC50為10μM。LDH活性分析結(jié)果表明rLj-RGD3能夠破壞HeyA8的細(xì)胞膜并釋放LDH，但是活性較弱，表明rLj-RGD3對(duì)HeyA8細(xì)胞較弱的毒性也是抑制其增值的因素之一。Hoechst33258染色結(jié)果顯示rLj-RGD3能夠促使HeyA8細(xì)胞內(nèi)染色質(zhì)發(fā)生固縮，且Annexin V和PI雙染結(jié)果顯示rLj-RGD3能夠增加HeyA8細(xì)胞的早期和晚期凋亡比例。這表明rLj-RGD3能夠誘導(dǎo)HeyA8細(xì)胞發(fā)生凋亡。本研

4、究通過采用流式細(xì)胞術(shù)及western blot的方法證實(shí)了rLj-RGD3是通過改變線粒體膜電位、細(xì)胞骨架的排列、胞內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平、鈣離子的濃度以及MAPK信號(hào)通路相關(guān)蛋白的磷酸化水平來誘導(dǎo)HeyA8細(xì)胞發(fā)生凋亡。此外，粘附實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明rLj-RGD3能夠通過競爭性結(jié)合整合素來抑制HeyA8細(xì)胞粘附到細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，如纖連蛋白、膠原Ⅳ以及層粘連蛋白。這表明rLj-RGD3能夠識(shí)別多種類型的整合素分子。最后，Transwell實(shí)