阿托伐他汀抑制腹主動(dòng)脈瘤形成的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、1.背景和意義 動(dòng)脈粥樣硬化是腹主動(dòng)脈瘤發(fā)生的獨(dú)立的危險(xiǎn)因子，炎癥及細(xì)胞外基質(zhì)的重構(gòu)在腹主動(dòng)脈瘤的發(fā)病中起著至關(guān)重要的作用。各種炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)促進(jìn)基質(zhì)金屬酶的分泌，引起腹主動(dòng)脈彈力纖維及膠原纖維的損傷，最終導(dǎo)致腹主動(dòng)脈瘤的形成和發(fā)展。核轉(zhuǎn)錄因子-кB(nuclearfactor-кB，NF-кB)活化具有啟動(dòng)、調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄作用，是促炎癥基因表達(dá)的樞紐之一。活化的NF-кB可能是腹主動(dòng)脈瘤擴(kuò)張的重要調(diào)節(jié)因子，但其在腹主動(dòng)脈瘤早期形

2、成中的作用目前未見報(bào)導(dǎo)。過氧化物酶體增殖物活化型受體γ(peroxisomeproliferators-activatedreceptors，PPARγ)激動(dòng)劑可抑制單核/巨噬細(xì)胞基質(zhì)金屬酶(matrixmetalloproteinases，MMPs)的釋放，對(duì)血管的炎癥反應(yīng)具有重要的調(diào)節(jié)作用，因而對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化及腹主動(dòng)脈瘤的形成可能有抑制作用。但目前PPARγ對(duì)腹主動(dòng)脈瘤早期形成中的作用尚不清楚。 他汀類藥物是治療和預(yù)防動(dòng)脈粥

3、樣硬化最有效的藥物之一，除能調(diào)節(jié)血脂外，還具有重要的抗炎作用，臨床觀察長(zhǎng)程使用他汀類藥物可降低腹主動(dòng)脈瘤術(shù)后患者的死亡率。這些研究提示他汀類藥物對(duì)動(dòng)脈瘤可能有好處，但其療效和可能機(jī)制仍需要進(jìn)一步明確。 本研究目的：探索建立與人腹主動(dòng)脈瘤形態(tài)和組織學(xué)相似的動(dòng)物模型的建模方法；驗(yàn)證炎癥及基質(zhì)金屬酶在腹主動(dòng)脈瘤形成中的作用；觀察核轉(zhuǎn)錄因子NF-кB、PPARγ在實(shí)驗(yàn)性腹主動(dòng)脈瘤中的表達(dá)，從而在核轉(zhuǎn)錄水平對(duì)腹主動(dòng)脈瘤的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行初步研

4、究；觀察阿托伐他汀對(duì)實(shí)驗(yàn)性AAA形成和腹主動(dòng)脈瘤壁組織中基質(zhì)金屬酶-9(matrixmetalloproteinases-9，MMP-9)及NF-кB、PPARγ的影響，探索其可能的作用機(jī)制。為臨床運(yùn)用他汀類藥物干預(yù)小的AAA患者及AAA手術(shù)后患者的用藥尋找新的依據(jù)。 2.研究方法和內(nèi)容 本研究共分二個(gè)部分。第一部分改進(jìn)建立腹主動(dòng)脈瘤模型的方法并進(jìn)行形態(tài)學(xué)研究：以大鼠腎下腹主動(dòng)脈加壓灌注彈力蛋白酶建立AAA動(dòng)物模型為基礎(chǔ)

5、，稍加改進(jìn)建立簡(jiǎn)便、迅速、穩(wěn)定性及成功率高的AAA大鼠模型。第二部分觀察MMP-9、PPARγ、NF-кB在大鼠腹主動(dòng)脈瘤模型中的表達(dá)：造模后14天收取標(biāo)本，切片行病理形態(tài)學(xué)、彈力蛋白和膠原染色的組織學(xué)觀察；運(yùn)用免疫組化方法及RT-PCR的方法觀察MMP-9和NF-кB、PPARγ在腹主動(dòng)脈瘤組織中的蛋白及mRNA表達(dá)。同時(shí)觀察阿托伐他汀在抑制腹主動(dòng)脈瘤形成中的作用及可能機(jī)制：實(shí)驗(yàn)組造模前一周開始阿托伐他汀皮下注射，造模后繼續(xù)用藥二周；

6、對(duì)照組造模前一周開始生理鹽水肌注至造模后二周。取標(biāo)本切片行病理形態(tài)學(xué)及彈力纖維和膠原纖維染色的組織學(xué)觀察，同時(shí)觀察阿托伐他汀對(duì)腹主動(dòng)脈中MMP-9和NF-кB、PPARγ蛋白及mRNA表達(dá)的影響。應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組數(shù)據(jù)描述均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((-x)±s)，兩組間數(shù)值的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，率的比較用確切概率x2檢驗(yàn)。雙變量相關(guān)分析用Pearson相關(guān)分析法。 3.研究結(jié)果及結(jié)論 3.1研

7、究結(jié)果：(1)腹主動(dòng)脈瘤模型的建立：采用腹正中一次性切口、髂總動(dòng)脈一次性進(jìn)入套管針的方法減少手術(shù)步驟，同時(shí)將灌注時(shí)間從2小時(shí)縮短至30分鐘以縮短手術(shù)和麻醉時(shí)間，明顯提高實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生存率，降低了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡率(實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物存活率為86％，對(duì)照組存活率約為60％，P＜0.05)，且兩種方法對(duì)腹主動(dòng)脈瘤形成率無明顯影響(實(shí)驗(yàn)組為92％，對(duì)照組為88％，P＞0.1)。 (2)阿托伐他汀對(duì)腹主動(dòng)脈瘤形成的作用：術(shù)后第14天，對(duì)照組大鼠腹主動(dòng)

8、脈直徑擴(kuò)張率為168％-200％、腹主動(dòng)脈瘤形成率為90％；實(shí)驗(yàn)組大鼠腹主動(dòng)脈直徑擴(kuò)張率為20％-103％，腹主動(dòng)脈瘤形成率為20％。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)兩組大鼠腹主動(dòng)脈擴(kuò)張率及腹主動(dòng)脈瘤形成率之間差異均有顯著意義(P＜0.05)。(3)MMP-9、PPARγ、NF-кB在大鼠腹主動(dòng)脈瘤模型中的表達(dá)：病理切片檢查示對(duì)照組動(dòng)脈中膜彈力組織嚴(yán)重受損，外膜炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯；實(shí)驗(yàn)組動(dòng)脈組織見中外膜稍增厚，彈力纖維未見明顯斷裂消失等受損表現(xiàn)，未見明顯炎性

9、細(xì)胞浸潤(rùn)。對(duì)照組腹主動(dòng)脈MMP-9、NF-кB表達(dá)升高，PPARγ低水平表達(dá)。實(shí)驗(yàn)組腹主動(dòng)脈MMP-9、NF-кB表達(dá)明顯降低、PPARγ表達(dá)明顯增強(qiáng)(P＜0.05)。Pearson相關(guān)分析法分析MMP-9mRNA的變化與NF-кBmRNA的變化有正相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)R=0.748，P=0.005)；PPARγmRNA的變化與NF-кBmRNA的變化有負(fù)相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)R=-0.691，P=0.013)。兩組大鼠血清血脂水平差異無顯著

10、意義(P＞0.1)。 3.2研究結(jié)論：(1)在彈力蛋白酶誘導(dǎo)的大鼠腹主動(dòng)脈瘤模型中，采用腹部正中一次切口，從髂總動(dòng)脈進(jìn)套管針，在灌注總量不變的前提下，將灌注時(shí)間縮短至30分鐘，可簡(jiǎn)化手術(shù)步驟，降低動(dòng)物死亡率，不影響腹主動(dòng)脈瘤的形成。(2)在腹主動(dòng)脈瘤壁組織中MMP-9、NF-кB表達(dá)增強(qiáng)，PPARγ呈低水平表達(dá)。(3)在血脂無明顯降低的情況下，阿托伐他汀明顯降低腹主動(dòng)脈的擴(kuò)張率及動(dòng)脈瘤的發(fā)生率，減少炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，其機(jī)制可能與刺激