小檗堿對(duì)NAFLD大鼠肝組織p38MAPK-STAT3信號(hào)通路mRNA及蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　通過(guò)高脂飲食誘導(dǎo)建立NAFLD大鼠模型，觀察小檗堿對(duì)NAFLD大鼠肝組織p38MAPK-STAT3信號(hào)通路相關(guān)基因及蛋白表達(dá)的調(diào)控作用，探討小檗堿防治NAFLD的作用機(jī)制。
　　方法：
　　24只SPF級(jí)健康雄性SD大鼠，體重200g±20g，適應(yīng)性喂養(yǎng)1w后按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為3組，每組8只。分別為：正常對(duì)照組，模型組和小檗堿組。NAFLD大鼠模型的建立：正常組予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)，其余兩組均以高脂飼料喂養(yǎng)（

2、基礎(chǔ)飼料88％，豬油10%，膽固醇1.5%，膽鹽0.5%）。在NAFLD大鼠模型建立的同時(shí)，小檗堿組以鹽酸小檗堿[100 mg·kg-1·d-1]灌胃進(jìn)行干預(yù)，正常組和模型組大鼠分別給予相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飲用水[10 mL·kg-1·BW]進(jìn)行灌胃，每天1次，連續(xù)8w。各組動(dòng)物均自由飲水進(jìn)食。8w末各組大鼠取肝組織行HE染色和油紅O染色觀察其病理學(xué)變化，全自動(dòng)生化儀檢測(cè)肝組織勻漿TC、TG含量；血清TC、TG、HDL-C、LDL-C、AST

3、及ALT改變；分別采用WST-1、TBA法檢測(cè)肝組織及血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量；實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法檢測(cè)肝組織p38MAPK、STAT3mRNA表達(dá)量；Western Blot方法檢測(cè)肝組織p38MAPK、STAT3及p-p38MAPK、p-STAT3蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1肝組織病理
　?。?）H&E染色示：正常組大鼠肝小葉、肝索結(jié)構(gòu)清晰完整，肝細(xì)胞質(zhì)均勻紅染，胞核大而圓，位

4、置居中，形態(tài)正常，細(xì)胞無(wú)明顯的脂肪空泡；模型組大鼠肝組織切片示肝竇、肝索結(jié)構(gòu)紊亂不清，胞漿內(nèi)可見(jiàn)大小不一的圓形脂滴，以大泡性脂滴為主，脂肪變性明顯，胞核被擠壓靠邊；小檗堿組大鼠肝組織切片在肝細(xì)胞形態(tài)、肝索結(jié)構(gòu)、脂肪變性等方面情況較模型組有顯著改善。
　?。?）油紅O染色示：正常組大鼠肝細(xì)胞排列整齊、間隙清晰，細(xì)胞肝竇結(jié)構(gòu)完整清晰，細(xì)胞核淡藍(lán)居中，肝細(xì)胞內(nèi)無(wú)明顯大片橘紅色脂滴；模型組大鼠肝細(xì)胞腫脹變形，肝細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)大片的紅染脂滴，相

5、鄰細(xì)胞間紅染融合，肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，肝索不清，細(xì)胞核深藍(lán)染色、多被脂滴擠壓、向邊緣靠攏；小檗堿組肝細(xì)胞內(nèi)脂滴紅染、肝索結(jié)構(gòu)紊亂等情況介于正常組與模型組之間。
　　2生化指標(biāo)
　　（1）血脂、肝脂含量測(cè)定
　　血脂：與正常組相比，模型組大鼠血清TC、TG、LDL-C含量顯著升高(P<0.01,P<0.05)，HDL-C含量顯著降低(P<0.01)；與模型組相比，小檗堿組大鼠血清TC、TG、LDL-C含量降低顯著(P<0.0

6、5)，HDL-C含量升高顯著(P<0.05)。肝脂：與正常組相比，模型組大鼠肝組織TC、TG含量顯著升高(P<0.01，P<0.05)，與模型組相比，小檗堿組大鼠肝組織TC、TG含量顯著降低(P<0.01，P<0.05)。
　?。?）血清AST、ALT含量及AST/ALT比值
　　與正常組相比，模型組大鼠血清AST含量升高明顯(P<0.05)，ALT含量雖有所增高，但結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），AST/ALT也有升高，

7、但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與模型組比較，小檗堿組AST含量下降明顯(P<0.05)，ALT含量下降無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），AST/ALT比值降低無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　3氧化應(yīng)激因子測(cè)定
　　與正常組比較，模型組大鼠肝組織及血清SOD活力明顯降低(P<0.01)；與模型組比較，小檗堿組肝組織及血清SOD活力明顯升高(P<0.01，P<0.05)。與正常值比較，模型組大鼠肝組織及血清MDA水平明顯升高(

8、P<0.01)；與模型組比較，小檗堿組的MDA水平顯著降低(P<0.05，P<0.01)。
　　4肝組織p38MAPK、STAT3mRNA、p38MAPK、p-p38MAPK、STAT3、p-STAT3蛋白表達(dá)水平
　　模型組大鼠肝組織p38MAPK及STAT3 mRNA的表達(dá)較正常組明顯上升(P<0.05，P<0.01)。小檗堿組大鼠肝組織p38MAPK及STAT3 mRNA表達(dá)水平較模型組明顯下降(P<0.05)。

9、>　　模型組大鼠肝組織p38MAPK、p-p38MAPK、STAT3、p-STAT3蛋白的表達(dá)水平較正常組顯著升高(P<0.05)；小檗堿組大鼠p-p38MAPK、p-STAT3蛋白表達(dá)量較模型組顯著下降(P<0.05)，p38MAPK、STAT3蛋白表達(dá)水平較模型組也有明顯下調(diào)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　(1)通過(guò)高脂飼料對(duì)SD大鼠喂養(yǎng)8w能夠成功建立NAFLD大鼠模型。
　　(2)NAF