自身抗體免疫層析檢測方法與重金屬鉻離子納米ELISA的建立.pdf

1、目的：建立一種高效、快速（5~8 min）、簡便的膠體金免疫層析試紙條應(yīng)用于臨床檢測血清中自身抗體，用來輔助診斷自身免疫性疾?。ˋutoimmune diseases，AID），實現(xiàn)檢測結(jié)果信息快速、及時的反饋。
　　方法：抗SSA/SSB自身抗體免疫層析檢測技術(shù)的建立，是利用金黃色葡萄球菌A蛋白（SPA）標(biāo)記于金納米顆粒（Gold nanoparticles，AuNPs）上，并將金標(biāo)SPA噴涂在結(jié)合墊上，抗原（SSA/SSB）噴

2、涂在硝酸纖維素膜（NC膜）上特定位置作為檢測線（Test line。T line），山羊抗人的多克隆抗體噴涂在NC膜的另一特定位置作為校準(zhǔn)線（Calibration line。C line）；對試紙條的樣品墊、結(jié)合墊、NC膜、血清樣品稀釋緩沖液以及稀釋倍數(shù)等方面的條件進(jìn)行綜合優(yōu)化并組裝試紙條。利用上述方法建立的膠體金免疫層析試紙條檢測血清樣本并與目前醫(yī)院臨床上常用的檢測方法進(jìn)行檢測結(jié)果符合率的比較。
　　結(jié)果：本實驗建立的抗SSA

3、抗體膠體金免疫層析試紙條與目前國內(nèi)臨床常用的LIA方法檢測血清樣本的結(jié)果總符合率為95.12％；本實驗建立的抗SSB抗體膠體金免疫層析試紙條與目前臨床常用的LIA方法檢測血清樣本的結(jié)果總符合率為97.82%。
　　結(jié)論：本研究建立檢測抗SSA抗體、抗SSB抗體的膠體金免疫層析試紙條檢測臨床血清樣本與目前國內(nèi)臨床上使用的主要方法LIA、ELISA的檢測結(jié)果均有較高的符合率，該方法操作簡便，檢測結(jié)果可在（5~8 min）內(nèi)完成，有良好

4、的市場應(yīng)用前景。
　　目的：建立一種高效、快速（5~8 min）、簡便的膠體金免疫層析試紙條應(yīng)用于臨床檢測血清中自身抗體，用來輔助診斷自身免疫性疾?。ˋutoimmune diseases，AID），實現(xiàn)檢測結(jié)果信息快速、及時的反饋。
　　方法：抗SSA/SSB自身抗體免疫層析檢測技術(shù)的建立，是利用金黃色葡萄球菌A蛋白（SPA）標(biāo)記于金納米顆粒（Gold nanoparticles，AuNPs）上，并將金標(biāo)SPA噴涂在結(jié)合墊

5、上，抗原（SSA/SSB）噴涂在硝酸纖維素膜（NC膜）上特定位置作為檢測線（Test line。T line），山羊抗人的多克隆抗體噴涂在NC膜的另一特定位置作為校準(zhǔn)線（Calibration line。C line）；對試紙條的樣品墊、結(jié)合墊、NC膜、血清樣品稀釋緩沖液以及稀釋倍數(shù)等方面的條件進(jìn)行綜合優(yōu)化并組裝試紙條。利用上述方法建立的膠體金免疫層析試紙條檢測血清樣本并與目前醫(yī)院臨床上常用的檢測方法進(jìn)行檢測結(jié)果符合率的比較。
　

6、　結(jié)果：本實驗建立的抗SSA抗體膠體金免疫層析試紙條與目前國內(nèi)臨床常用的LIA方法檢測血清樣本的結(jié)果總符合率為95.12%；本實驗建立的抗SSB抗體膠體金免疫層析試紙條與目前臨床常用的LIA方法檢測血清樣本的結(jié)果總符合率為97.82%。
　　結(jié)論：本研究建立檢測抗SSA抗體、抗SSB抗體的膠體金免疫層析試紙條檢測臨床血清樣本與目前國內(nèi)臨床上使用的主要方法LIA、ELISA的檢測結(jié)果均有較高的符合率，該方法操作簡便，檢測結(jié)果可在（5

7、~8 min）內(nèi)完成，有良好的市場應(yīng)用前景。
　　目的：建立一種新的、可裸眼觀察檢測結(jié)果的等離子納米傳感器，該方法檢測結(jié)果判讀簡單，無需昂貴的儀器，可適用于醫(yī)療資源匱乏的地區(qū)。
　　方法：利用過氧化氫能夠腐蝕三角銀納米片，使得三角銀納米片的尺寸大小和形狀發(fā)生改變，局部等離子共振（LSPR）發(fā)生改變從而表現(xiàn)出特有的光學(xué)特征(由藍(lán)色變紫色)。根據(jù)這一現(xiàn)象，本研究建立了一種等離子納米傳感器去檢測實際水樣中的三價鉻離子Cr(III)

8、。該方法主要是在競爭ELISA的基礎(chǔ)上（過氧化氫酶標(biāo)記二抗），利用過氧化氫和三角銀作為底物顯色系統(tǒng)，過氧化氫酶消耗過氧化氫來調(diào)控體系中剩余過氧化氫的濃度，進(jìn)而調(diào)控三角銀納米片受腐蝕的程度。三角銀的這種LSPR變化強度（顏色和吸收光譜）與鉻的濃度呈正相關(guān)，我們對該方法進(jìn)行可行性驗證、靈敏度和特異性評價并用該方法檢測實際水樣中的加標(biāo)Cr(III)的濃度，檢測結(jié)果與ICP-MS的檢測結(jié)果進(jìn)行比較。
　　結(jié)果：本研究建立的等離子傳感器檢測